X
你好,欢迎来到仪多多。请登录 免费注册
仪器交易网
0我的购物车 >
购物车中还没有商品,赶紧选购吧!

安捷伦液相色谱仪保留值定性的方法及操作规程

时间:2020-04-16    来源:仪多多仪器网    作者:仪多多商城     

安捷伦液相色谱仪保留值定性的方法

  气相色谱仪液相色谱仪操作中,当仪器的操作条件保持不变时,任一物质的色谱峰总是在色谱图上固定的位置出现,即有一定的保留值。又包含:死时间,保留时间,校下保留时间,保留体积等等。

  在液相色谱仪中保留值定性的方法主要是用直接与已知标准物对照的方法。当未知峰的保留值(t'R或V'R)与某一已知标准物完全相同时,则未知峰可能与此已知标准物是同一物质,特别是在改变色谱柱或改变洗脱液的组成时,未知峰的保留值与已知标准物的保留值仍能完全相同,则可以基本上认定未知峰与标准物是同一物质。

  在利用保留值数据进行比对和定性分析时要特别注意到:由于液相色谱柱的填柱技术较复杂,液相色谱仪所使用的色谱柱的重现性目前还很不理想,即使是同一批号的柱子,重现性也不一致,这就使得使用保留值数据进行分析受到限制。因此,目前保留值数据只能作为定性分析的参考。可以根据这些数据和对样品的了解来选用已知标准物,再用这些已知标准物与未知物在同一色谱条件下直接进行对比。

  简单的保留值定性方法是将已知标准物质加到样品中去,若使某一峰增高,而且在改变色谱柱或洗脱液的组成后,仍能使这个峰增高,则可基本认定这个峰所代表的组分与已知标准物质为同一物质。

  目前一些液相色谱仪仪器配备了三维图谱检测器,如二极管阵列检测器,在进行未知组分与已知标准物质比对时,除了比较保留时间外,还可以比较两个峰的立体图形。如在使用二极管阵列检测器时,除了比较未知组分与已知标准物质的保留时间外,还可比较两者的紫外光谱图,如果保留时间一样,两者的紫外光谱图也完全一样,则可基本上认定两者是同一物质;若保留时间虽一样,但两者的紫外光谱图有较大差别,则两者不是同一物质。这种利用三维图谱比较对照的方法大大提高了保留值比较定性方法的准确性。美国Bio-Rad公司的血药分析仪(Remeeli)就是依靠三维图谱的综合数据的分析来鉴别未知药物的。

标签: 液相色谱仪
液相色谱仪 安捷伦液相色谱仪保留值定性的方法_液相色谱仪

在使用液相色谱仪要注意那四点

  液相色谱仪作为分析实验室高端必备仪器之一,是实验室分析员应用频率较高的仪器,纵然是经常使用的经验丰富的老司机在使用过程里不可避免的还是往往疏忽一些问题,从而导致一些仪器的故障。方便快速的分析过程固然重要,但是为了多种样品而忽略了一些细节步骤,总是会犯些错。在使用液相色谱仪时四大关键因素,对正确使用极为重要,下面给大家说说:

  1、液相色谱仪本身

  对于仪器本身一般不会有问题,特别是刚买回来的新仪器。对于仪器本身重要的就是仪器的校验,刚买回来的仪器一般都是由卖家先对仪器做系统的确认工作(包括IQ、PQ、OQ),确认顺利通过后,再请国家或省级仪器检定局的来校验,检定合格后就可以放心使用了,除此之外,一些做得好的公司每半年会对仪器进行一次的内部校验,目的就是为了保证仪器的正常可运行状态。

  2、色谱条件:

  色谱条件一般包括流动相、色谱柱、检测波长、流速及进样量。

  流动相就涉及到配制流动相所用到的水和试剂试液,水一般要求用超纯水或其他水的电阻率不大于18、2兆欧级别,试剂试液要求用色谱级别的,原因为防止水和试剂试液中的杂质对色谱结果的干扰。

  色谱柱会因不同的品种而有不同的要求,但每根色谱柱都有它的清洗要求,这个在色谱柱说明书上都可以找到,一定要根据上面的要求进行,否则会造成色谱柱效下降和色谱柱的使用寿命缩短,检测波长也会因品种的不同有不同的要求,这里需要指出的是要注意观察检测器氘灯能量的变化,比如基线波动大,活性成分的响应值突然变小等,都有可能是氘灯的能量不足所引起的,氘灯一般建议使用800小时,但实际上使用时间不止,可根据实际情况更换。

  流速也因品种的不同而不同,一般为1、0ml/min,流速是不可随意改动的,特别是作为QC人员,但是作为研发人员,有时为了摸索条件或进行方法耐用性验证,会对流速进行改变以评价方法的适用性。对于进样量因不同的品种也有不同规定,如果使用六通阀自动进样,一般进样精密度都很好,不需强调什么。

  3、操作人员:

  首先,作为液相色谱仪操作人员,一定要认真学习液相的说明书,掌握液相硬件和软件的操作,掌握日常的维护保养,掌握最基础故障的排除和维修。

  一般液相色谱仪的操作规程也是有操作人员起草的,所以只要严格按照操作要求进行操作,一般不会出现问题,当然这里需要特别指出的是对于液相的日常维护保养很重要,比如流动相的过滤、脱气、泵密封垫的清洗、系统管路的清洗、溶剂过滤头的清洗等,倘若不坚持,很容易导致色谱柱堵塞、系统压力过强、色谱峰异常等不必要的故障,浪费时间。

  其次,操作人员在配制液相色谱仪分析用待测样品溶液时,由同一个人单独完成,以免不必要的偶然误差从而造成分析的失败或误差。

  4、液相安装环境:

  液相色谱仪应尽量安装于水平、远离振动、电磁干扰的屋内的台面上,有条件的话尽量将液相数据处理系统分隔开,一个是防止色谱基线噪音偏大,基线不稳等,一个是为减少对人体的危害。

标签: 液相色谱仪
液相色谱仪 在使用液相色谱仪要注意那四点_液相色谱仪

分析液相色谱仪的常规部件

  液相色谱仪由包括输液系统,进样系统,分离系统,检测系统,数据处理系统,输助设备(色谱柱恒温箱等)几大部分组成的。但是在机器工作的同时还需要样本处理设备的支持。只有各个部分都能协调的运作才能发挥出机器的较佳的性能。因此我们在选择仪器的时候需要充分考虑到仪器的方方面面才能拿到自己满意的机器。

  首先从常规的几个部件做个简单的分析。

  (一)输液泵应具备如下性能:

  ①RSD(流量稳定性)<0.3%;

  ②流量范围宽,0.1~5.0ml/min内连续可调,有的实验则需要更大流量;

  ③输出压一般应能达到150~400kg/cm2,流量越大,最高压力越低;

  ④液缸容积小,有助于减少流动相死体积,利于清洗。

  ⑤密封性能好,耐腐蚀。

  (二)检测器

  ①紫外检测器,分为可变单波长检测器VWD和二极管阵列检测器DAD,可以检测有紫外吸收的物质

  ②荧光检测器,检测有荧光的物质

  ③视差折光检测器,通用型检测器,但对环境要求极为苛刻,而且灵敏度低

  ④ELSD,蒸发光散射检测器

  ⑤MSD,质谱检测器

  常用的是紫外检测,然后是MSD和ELSD

  (三)色谱柱

  要求柱效高、选择性好,分析速度快等。目前市场上销售的用于HPLC的各种微粒填料如多孔硅胶以及以硅胶为基质的键合相、有机聚合物微球(包括离子交换树脂)、氧化铝、多孔碳等,其粒度一般为3,5,7,10μm等,柱效理论值可达5~16万/米。

  一般的分析只需5000塔板数的柱效;同系物分析500即可;难分离物则可用2万的柱子。

  因此一般10~30cm左右的柱长基本能满足复杂混合物分析的需要。所以要根据自己实际情况来选择合适的柱子。

  柱效受柱内外因素影响,为使色谱柱达到较佳效率,除柱外死体积要小外,还要有合理的柱结构(尽可能减少填充床以外的死体积)及装填技术。即使可以的装填技术,在柱中心部位和沿管壁部位的填充情况总是不一样的,靠近管壁的部位比较疏松,易产生沟流,流速较快,影响冲洗剂的流形,使谱带加宽,这就是管壁效应。这种管壁区大约是从管壁向内算起30倍粒径的厚度。在一般的液相色谱系统中,柱外效应对柱效的影响远远大于管壁效应。

  此外,温度在色谱分析中是个不容忽视的环境条件,环境温度对溶剂的溶解能力、色谱柱的性能、流动相的粘度都有影响。而且不同的检测器对温度的敏感度不一样。保持恒定的温度对实验而言是个绝对不容忽视的条件,因此也要留意注温箱的选择。以保证实验结果的准确性。

  (四)进样器

  进样装置要求:密封性好,重复性好,死体积小,保证中心进样,进样时对色谱系统的压力、流量影响小。而且进样方式多种多样,可分为隔膜进样、停流进样、阀进样、自动进样。自动进样器则是市场发展的趋势。

  (五)数据处理系统

  一般专业的液相色谱仪生产厂家都有自己配套的液相色谱仪控制软件。但有不少液相色谱仪可以使用通用型的色谱数据工作站进行数据计算处理。进口软件价格比较高,这个自己得根据资金选择了。

标签: 液相色谱仪
液相色谱仪 分析液相色谱仪的常规部件_液相色谱仪

上一篇:磁翻板液位计安装法兰阀门故障及...

下一篇:简单解决压力表值超差问题及工作...

  • 手机多多
  • 官方微信订阅号
商品已成功加入购物车!