我们如何来评价一台紫外可见分光光度计的优劣呢?首先,我们要来考察它的外观。然后,我们探讨一下会对仪器的使用有很大影响的几个重要指标:
1、杂散光它指不应该有光的地方有了光。
它是光谱测量中误差的主要来源。这个值当然越小越好了。
2、光度准确度光度准确度指实际测量的光度读数值与真值之差。
它是用户对仪器的直接要求,每个用户都必须重视。
3、噪声噪声也是仪器的重要指标之一。
它表征仪器的做稀溶液的能力。这个指标也是越小越好。
4、光谱带宽指从单色器射出的单色光谱线强度轮廓曲线的1/2高度处的谱带宽度。
表征仪器的光谱分辨率。按照比耳定律,光谱带宽应该是越小越好的,但是如果仪器的光源能量弱,光学传感器的灵敏度低时,光谱带宽小了,也得不到理想的测量结果的。所以,选择和使用仪器时一定注意。
5、稳定性稳定性是使用者较为关注的指标之一。
仪器的宗旨就是稳定可靠,不稳定更谈不上可靠了。
6、噪声噪声也是仪器的重要指标之一。
它表征仪器的做稀溶液的能力。这个指标也是越小越好。
7、波长的准确度和重复性仪器的每个值都是在一定的波长下测得的,如果所示的波长和实际波长偏差万里,那么测出的值和真值的吻合度从何谈起呢?可见这个指标的重要性。
总之,这几个指标都是相互独立又相互关联的,每个指标对仪器的使用都有很大影响。希望大家在选购紫外、可见分光光度计时,多做比较,多做判断,切实找到一个稳定可靠的好帮手。
我们选择时需要根据自己实验室的需要,主要考虑光学构造和光源、检测方法、样品类型和数据处理等因素。
1.光学构造
一般来说,紫外光分光光度计分为单光束和双光束两类。1单光束型主要是依赖单束光进行测量。一束给定波长的光通过对照物,然后再通过实际样品溶液,就能得到吸光结果。
双光束型则是通过一个斩光轮(mirroredchopperwheel)将一束光分成两束,分别测量对照样品和实际样品。可以最小化光漂移(lampdrift)和减少测量时间。一些双光型光度计不利用斩光轮,而是利用一种光束分光器来代替,将一束光分成两束平行的光然后同时测量对照样品和目的样品。因为增加了测量的速度,所以双光束分光光度计在测量一些溶液随时间动态变化的研究中大有用处。
2.样品类型
在大部分的样品类型中,分光光度计可接受样品孔、小玻璃管cuvette、吸浆管和微孔板。
用小试管装样品容量一般从1μl-5ml,并且一些仪器装备了各种样品固定物来满足各种改变需要。
3.光源和检测方法
分光光度计的光谱也是需要考虑的一个重要因素。
紫外分光光度计一般覆盖190nm和380nm波长,通常利用氘灯照明。一些特殊的仪器可以提供满足光子学和半导体研究需要的光谱范围。
有的仪器可以选择多种光源:紫外光、可见光和甚至红外光(780nm至3,000nm)。钨灯和卤素灯一般只覆盖可见光部分(大约380nm到800nm)。而氙灯则可以覆盖紫外光和可见光区域。
分光光度计的带宽(bandwidth)很大程度上依赖于单色仪的狭缝的宽度。可以投射出实验精确要求的光谱。一种严格带宽使得仪器能对复杂的混合物进行高分辨率的吸光测量。可变的单色仪的狭缝宽度能使一台分光光度计满足多种实验需要。
4.样品类型
在大部分的样品类型中,分光光度计可接受样品孔、小玻璃管cuvette、吸浆管和微孔板。
用小试管装样品容量一般从1μl-5ml,并且一些仪器装备了各种样品固定物来满足各种改变需要。
5.数据管理
大部分单机型的分光光度计包含了驱动仪器运行和管理数据的软件。高性能的仪器,通常与PC机一起联用,需要从制造商提供额外的软件。
由此可见紫外、可见分光光度计是一种常规的实验室分析仪器。可广泛用于无机物、有机物的定性、定量分析中,在科研、制药、化工、环保、卫生、防疫等领域中发挥重要的作用。
紫外分光光度计就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。紫外分光光度计可以在紫外可见光区任意选择不同波长的光。物质的吸收光谱就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量,相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构,其吸收光能量的情况也就不会相同,因此,每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线,可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量。
紫外可见分光光度计详细操作流程及校准方法:
一、紫外可见分光光度计光度测量
在模式选择屏幕中选择<1.Photometric光度>选项,将显示参数配置屏幕;
用GOTOWL键设定测量波长;
按F2键设定进样控制;
按START/STOP键时,测量开始,显示测量屏幕;
如需做空白校正,应在测量前先设置空白样品,然后,按AUTO-ZERO键,将测量值置为OABS(100%);
二、紫外可见分光光度计校正
开机预热10分钟足矣;
放入黑块和标样(没有的自己配),关闭盖子;
校0;
把灯光对着黑块,把透光度调0;
把灯光对标样,将吸光度调到100%;
三、参比溶液介绍
参比溶液又称空白溶液。测量时用作比较的、不含被测物质但其基体尽可能与试样溶液相似的溶液。通常,用参比溶液扫描的曲线应是一条平坦的直线。有时,基体中,虽不含被测物质,但含有别的物质,这时必须保证其不影响测试。经常碰到的是试剂空白中含有被测物质,此时必须经过纯化将其除去。否则将影响测定结果。
四、紫外可见分光光度计使用注意事项
1.开机前应先预热15分钟,然后开机自检;
2.湿度要控制在75%左右,温度在5~30度之间;
3.仪器要稳压电源,接地要好。并且避免阳光直接照射;
5.常见故障及处理方法:
光门不能完全关闭:修复光门部件,使其完全关闭;
透过率“100%”旋到底了。解决方法:重新调整“100%”旋钮;
仪器严重受潮:可打开光电管暗盒,用电吹风吹上一会儿使其干燥,并更换干燥剂;以上为紫外可见分光光度计的具体操作方法及使用注意事项,希望能给予您帮助。
紫外可见分光光度计是由光源、单色器、吸收池、检测器和信号处理器等部件组成。光源的功能是提供足够强度的、稳定的连续光谱。
紫外光区通常用氢灯或氘灯,见光区通常用钨灯或卤钨灯。单色器的功能是将光源发出的复合光分解并从中分出所需波长的单色光。色散元件有棱镜和光栅两种。
紫外可见分光光度计特点:
1、采用同步正弦机构,波长准确度高,重复性好
2、24位高速、高精度A/D转换,仪器具有极高的灵敏度和反应速度
3、能直接建立标准曲线,并可用标准曲线进行相关的测试,可连续测试和存储200组数据,并可存储200条标准曲线,用户可根据编号方便调用,测试数据可断电保持
4、波长自动校准、自动设定、偏差自我修复
5、插座式钨灯、氘灯设计,换灯免光学调试
6、采用悬架式光学系统设计,整体光路固定在8mm厚的切削铝制无变形基座上,底板的变形和外界的震动对光学系统不产生任何影响,从而大大提高了仪器的稳定性和可靠性
7、标配元析公司的扫描软件可直接完成光度测量、定量测试、定性测试、动力学测试、多波长测试、DNA/蛋白质测试及数据图谱的处理。
可见分光光度计的波长适用范围一般从350nm左右开始到1100nm左右,紫外可见分光光度计的波长适用范围一般从190nm到1100nm.从这点区别上看就是波长的适用范围不一样,紫外可见分光光度计多了从190到350nm左右这段波长.正式由于这段紫外光的区别,就决定了他们的仪器结构部件有一些不同了,他们的不同之处主要在于以下几个地方:
1、光源不同:可见分光光度计的光源一般只用钨灯,而紫外可见分光光度计是用钨灯 氘灯两个光源,同时还多了这两个光源灯的切换部件.这是因为钨灯的光谱范围主要在可见到近红外这段,氘灯主要在紫外端.也正是因为光源的不一样,紫外可见分光光度计也多了一个专门提供氘灯工作的氘灯电源了。
2、光学器件的不同:由于玻璃能吸收紫外波,而对可见到近红外端有比较好的透过性,所以可见分光光度计的一些光学部件可以使用玻璃,而紫外可见分光光度计就不能使用玻璃部件,一般使用石英光学部件.同时由于这个原因,在比色皿的选择上也就有不同了,可见分光光度计可以使用玻璃制的比色皿,而紫外可见分光光度计一般使用石英制的比色皿了。
3、接收器的不同:由于紫外可见分光光度计多了紫外波,所以在接收器的选择上也就不一样了.多了对紫外波的灵敏响应功能,这类接收器的价格就比可见分光光度计的接收器贵了很多了。
维修:仪器使用一定时间后,会积累一些污垢,可以由专业的维修师指定下进行维护,最后再恢复原状,检测、调校、记录。