造成液相色谱仪流动相供给不畅的原因可能是：流动相已经接近用完了，管路中吸入气体引起泵压力不稳定。
应经常观察贮液器中流动相的量，加足流动相保证所有样品分析完毕。输液管路上安装沉子至瓶底，贮液器盖上留一小孔正好夹住进液器，使其不能上下移动。
过滤器阻塞会引起管道和泵腔真空变化，使压力不稳。当过滤器被微粒所阻塞或长霉时，去掉过滤器后系统会运转正常，换上新的过滤器即可，有时候换上新过滤器任然不畅，那么就需要检查流动相的制备过程，或者换上大孔径的过滤器。不管如何，流动相都要重新过滤。
流速过高、阻力大，造成真空化现象，这是由于过滤器孔径、管道内径、流速和溶剂粘度等引起的。如果流速大于10mL/min，常会出现这种现象，试着用下列方法解决。
1、试用低流速，若问题解决了则再进行下一步；
2、换大孔径的过滤器；
3、增加进液管内径；
4、抬高或加压贮液器；
5、改低流速；
6、不用入口过滤器（但流动相一定要先过滤）。
当贮液器盖子太紧，在贮液器内形成真空，打出的流动相不连续。应松开盖子或留有1mm缝隙。
进液管路阻塞或弯曲折叠会使泵抽不到液，注意调整进液路道或更新。
液相色谱仪根据固定相是液体或是固体，又分为液-液色谱(LLC)及液-固色谱(LSC)。现代液相色谱仪由高压输液泵、进样系统、温度控制系统、色谱柱、检测器、信号记录系统等部分组成。与经典液相柱色谱装置比较，具有高效、快速、灵敏等特点。对高沸点、难气化合物的混合物通过色谱柱核淋洗剂并以实现分离。应用于生物化学、生物医学、环境化学、石油化工等部门。
液相色谱仪3大系统
系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来高效液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统，下面将分别叙述其各自的组成与特点。
1．进样系统
液相色谱仪一般采用隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作，进样量是恒定的。这对提高分析样品的重复性是有益的。
2．输液系统
该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。高压泵的一般压强为l．47～4．4X10Pa，流速可调且稳定，当高压流动相通过层析柱时，可降低样品在柱中的扩散效应，可加快其在柱中的移动速度，这对提高分辨率、回收样品、保持样品的生物活性等都是有利的。流动相贮存器和梯度仪，可使流动相随固定相和样品的性质而改变，包括改变洗脱液的极性、离子强度、PH值，或改用竞争性抑制剂或变性剂等。这就可使各种物质(即使仅有一个基团的差别或是同分异构体)都能获得有效分离。
3、分离系统
该系统包括色谱柱、连接管和恒温器等。色谱柱一般长度为10～50cm(需要两根连用时，可在二者之间加一连接管)，内径为2～5mm，由"优质不锈钢或厚壁玻璃管或钛合金等材料制成，住内装有直径为5～10μm粒度的固定相(由基质和固定液构成)．固定相中的基质是由机械强度高的树脂或硅胶构成，它们都有惰性(如硅胶表面的硅酸基因基本已除去)、多孔性(孔径可达1000?)和比表面积大的特点，加之其表面经过机械涂渍(与气相色谱中固定相的制备一样)，或者用化学法偶联各种基因(如磷酸基、季胺基、羟甲基、苯基、氨基或各种长度碳链的烷基等)或配体的有机化合物。因此，这类固定相对结构不同的物质有良好的选择性。例如，在多孔性硅胶表面偶联豌豆凝集素(PSA)后，就可以把成纤维细胞中的一种糖蛋白分离出来。另外，固定相基质粒小，柱床极易达到均匀、致密状态，极易降低涡流扩散效应。基质粒度小，微孔浅，样品在微孔区内传质短。这些对缩小谱带宽度、提高分辨率是有益的。根据柱效理论分析，基质粒度小，塔板理论数N就越大。这也进一步证明基质粒度小，会提高分辨率的道理。再者，高效液相色谱的恒温器可使温度从室温调到60C，通过改善传质速度，缩短分析时间，就可增加层析柱的效率。
液相色谱仪作为分析实验室高端必备仪器之一，是实验室分析员应用频率较高的仪器，纵然是经常使用的经验丰富的老司机在使用过程里不可避免的还是往往疏忽一些问题，从而导致一些仪器的故障。方便快速的分析过程固然重要，但是为了多种样品而忽略了一些细节步骤，总是会犯些错。在使用液相色谱仪时四大关键因素，对正确使用极为重要，下面给大家说说：
1、液相色谱仪本身：
对于仪器本身一般不会有问题，特别是刚买回来的新仪器。对于仪器本身重要的就是仪器的校验，刚买回来的仪器一般都是由卖家先对仪器做系统的确认工作（包括IQ、PQ、OQ），确认顺利通过后，再请国家或省级仪器检定局的来校验，检定合格后就可以放心使用了，除此之外，一些做得好的公司每半年会对仪器进行一次的内部校验，目的就是为了保证仪器的正常可运行状态。
2、色谱条件：
色谱条件一般包括流动相、色谱柱、检测波长、流速及进样量。
流动相就涉及到配制流动相所用到的水和试剂试液，水一般要求用超纯水或其他水的电阻率不大于18、2兆欧级别，试剂试液要求用色谱级别的，原因为防止水和试剂试液中的杂质对色谱结果的干扰。
色谱柱会因不同的品种而有不同的要求，但每根色谱柱都有它的清洗要求，这个在色谱柱说明书上都可以找到，一定要根据上面的要求进行，否则会造成色谱柱效下降和色谱柱的使用寿命缩短，检测波长也会因品种的不同有不同的要求，这里需要指出的是要注意观察检测器氘灯能量的变化，比如基线波动大，活性成分的响应值突然变小等，都有可能是氘灯的能量不足所引起的，氘灯一般建议使用800小时，但实际上使用时间不止，可根据实际情况更换。
流速也因品种的不同而不同，一般为1、0ml/min，流速是不可随意改动的，特别是作为QC人员，但是作为研发人员，有时为了摸索条件或进行方法耐用性验证，会对流速进行改变以评价方法的适用性。对于进样量因不同的品种也有不同规定，如果使用六通阀自动进样，一般进样精密度都很好，不需强调什么。
3、操作人员：
首先，作为液相色谱仪操作人员，一定要认真学习液相的说明书，掌握液相硬件和软件的操作，掌握日常的维护保养，掌握最基础故障的排除和维修。
一般液相色谱仪的操作规程也是有操作人员起草的，所以只要严格按照操作要求进行操作，一般不会出现问题，当然这里需要特别指出的是对于液相的日常维护保养很重要，比如流动相的过滤、脱气、泵密封垫的清洗、系统管路的清洗、溶剂过滤头的清洗等，倘若不坚持，很容易导致色谱柱堵塞、系统压力过强、色谱峰异常等不必要的故障，浪费时间。
其次，操作人员在配制液相色谱仪分析用待测样品溶液时，由同一个人单独完成，以免不必要的偶然误差从而造成分析的失败或误差。
4、液相安装环境：
液相色谱仪应尽量安装于水平、远离振动、电磁干扰的屋内的台面上，有条件的话尽量将液相数据处理系统分隔开，一个是防止色谱基线噪音偏大，基线不稳等，一个是为减少对人体的危害。
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