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制备液相色谱故障排查及解决方案及技术交流

时间:2020-04-20    来源:仪多多仪器网    作者:仪多多商城     

制备液相色谱故障排查及解决方案

  制备液相色谱中,有三个可以观察到的状态:柱压、检测器基线、谱图。通过观察和记录这三个状态可以监测仪器是否正常。若某个状态出现异常,故障排查和解决方案如下。

  1、柱压波动

  1)吸液管路进气泡

  ①溶剂不足,吸滤头吸入空气,添加溶剂并排气泡。

  ②吸滤头脏了或堵塞,用异丙醇(或5%稀硝酸)清洗。

  ③溶剂中有气泡(尤其两种以上溶剂混合),超声(或抽滤)脱气。

  2)泵流量不稳

  ①单向阀堵塞,大流速purge,若不能解决,则需拆下单向阀(异丙醇)超声清洗清洗或更换单向阀。

  ②柱塞密封圈磨损,更换密封圈。

  ③泵头污染,柱塞杆往复活动受阻,清洗泵头。

  3)柱床塌陷,维修或更换色谱柱

  4)流动相混合后吸放热导致温度变化,以致柱压波动,如乙腈和水混合吸热,甲醇和水混合放热。若影响实验结果,则增加柱温箱或流动相预混。

  2、柱压升高或超压。

  逐段排查堵塞的位置:

  1)先拆下色谱柱,接上两通运行,若是色谱柱堵塞:

  ①进样后样品析出,用合适的溶剂反冲色谱柱。

  ②缓冲盐析出,用大比例水相的流动相冲洗色谱柱。

  ③机械杂质堵塞筛板,异丙醇小流速反冲色谱柱。

  ④色谱柱污染严重,需维修或充填。

  2)混合器堵塞,维修或更换。

  3)六通阀堵塞,将泵液管路接到连接色谱柱的阀口处,将阀扳至load状态,用易溶样品的溶剂小流速冲洗。

  4)压力传感器故障,维修或更换。

  3、检测器基线波动

  1)基线有规律波动,且幅度较大,则可能有气泡持续进入流通池。排查气泡来源并用异丙醇冲洗检测器或色谱柱。

  2)基线小幅度规律波动,可能是检测器灯能量不足(能量下降后,低波长下灵敏度先下降。

  3)基线漂移。

  ①流动相在此检测波长下有吸收。更换流动相或改变波长。

  ②色谱柱或检测池污染。以异丙醇冲洗色谱柱或检测池,或将检测池中透镜玻片取出清洗。

  4、谱图重现性差

  1)检查方法设置,包括流速、梯度、波长。

  2)检查流动相配置是否有误,A、B两相是否放反。

  3)检查柱压与之前是否有差异,若有变化,则前面1和2进行排查。

  4)进样前色谱柱是否完全平衡好。

  5)样品溶解方法。

标签: 制备液相色谱
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制备液相色谱仪的介绍

  制备液相色谱仪是一种由储液瓶、高压泵、进样系统、色谱柱、检测器、废液瓶六部分组成的仪器。

  输液泵是HPLC系统中重要的部件之一。泵的性能好坏直接影响到整个系统的质量和分析结果的可靠性。输液泵应具备如下性能:

  ①流量稳定,其RSD应<0.5%,这对定性定量的正确性至关重要;

  ②流量范围宽,分析型应在0.1~10ml/min范围内连续可调,制备型应能达到100ml/min;

  ③输出压力高,一般应能达到150~300kg/cm2;

  ④液缸容积小;⑤密封性能好,耐腐蚀。

  泵的种类很多,按输液性质可分为恒压泵和恒流泵。恒流泵按结构又可分为螺旋注射泵、柱塞往复泵和隔膜往复泵。恒压泵受柱阻影响,流量不稳定;螺旋泵缸体太大,这两种泵已被淘汰。目前应用较多的是柱塞往复泵。

  柱塞往复泵的液缸容积小,可至0.1ml,因此易于清洗和更换活动相,特别适合于再循环和梯度洗脱;改变电机转速能方便地调节流量,流量不受柱阻影响;泵压可达400kg/cm2。其主要缺点是输出的脉冲性较大,现多采用双泵系统来克服。双泵按连接方式可分为并联式和串联式,一般说来并联泵的流量重现性较好(RSD为0.1%左右,串联泵为0.2~0.3%),但出故障的机会较多(因多一单向阀),价格也较贵。

  早期使用隔膜和停流进样器,装在色谱柱进口处。现在大都使用六通进样阀或自动进样器。进样装置要求:密封性好,死体积小,重复性好,保证中心进样,进样时对色谱系统的压力、流量影响小。HPLC进样方式可分为:隔膜进样、停流进样、阀进样、自动进样。

  1.隔膜进样。

  用微量注射器将样品注进专门设计的与色谱柱相连的进样头内,可把样品直接送到柱头填充床的中心,死体积几乎即是零,可以获得较佳的柱效,且价格便宜,操纵方便。但不能在高压下使用(如10MPa以上);此外隔膜轻易吸附样品产生记忆效应,使进样重复性只能达到1~2%;加之能耐各种溶剂的橡皮不易找到,常规分析使用受到限制。

  2.停流进样。

  可避免在高压下进样。但在HPLC中由于隔膜的污染,停泵或重新启动时往往会出现“鬼峰”;另一缺点是保存时间不准。在以峰的始末信号控制馏分收集的制备色谱中,效果较好。

  3.阀进样。

  一般HPLC分析常用六通进样阀(以美国Rheodyne公司的7725和7725i型常见),其关键部件由圆形密封垫(转子)和固定底座(定子)组成。由于阀接头和连接管死体积的存在,柱效率低于隔膜进样(约下降5~10%左右),但耐高压(35~40MPa),进样量正确,重复性好(0.5%),操纵方便。

  4.自动进样。

  用于大量样品的常规分析。

制备液相色谱仪的介绍_

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