色谱柱在使用中常见的问题就是柱压升高,如果柱压是在长时间使用过程中缓慢增加,属于正常现象。但柱压在使用过程中突然升高(系统管路堵塞及压力传感器故障除外,以下列举了部分常见原因及解决办法:
1、色谱柱头的过滤筛板堵塞或污染;
可以将色谱柱反方向用甲醇冲洗至正常压力,或者卸下色谱柱头,将其放在10%的稀硝酸内超声清洗10分钟,后再用纯水超声10分钟,重新装入色谱柱。
2、色谱柱头的填料被样品污染;
如确定色谱柱头的填料被污染,将柱头螺丝卸下,挖出柱内前段被污染的填料,用相同的柱填料重新填入,仔细修复后,重新安装上柱头螺丝。
3、色谱柱内缓冲液中的盐遇到高浓度的甲醇或其他有机溶剂,形成结晶析出;解决方法:如确定定是盐结晶,用10%的甲醇/水冲洗色谱柱使柱内盐全部溶解,再换高浓度甲醇。
步骤1:检查气体过滤器、载气、进样垫和衬管等
检查进样垫和气体过滤器,保证辅助气和检测器用气通畅有效。如果以前做过沸点较高的化合物,需要将进样口衬管清洗或更换。
步骤2:将螺母和卡套装在柱上,并将色谱柱两端口小心切平
在色谱柱的一端装上相应的螺母和卡套,此时色谱柱端口无前后之分,色谱柱支架的支撑部分应总是朝向着柱箱门。安装好螺母和卡套后,将色谱柱端口切平,并用放大镜进行检查,以确认切口和管壁成直角,并且没有残留的碎屑,没有毛边或不平的切割面。
步骤3:将色谱柱连于进样口上
通常来说,色谱柱的顶端应保持在进样口衬管的中下部,当进样针穿过隔垫完全插入进样口后,如果针尖与衬管中的色谱柱顶端相差1-2cm,这就是较为理想的状态。从色谱柱架上取出需要连接的足够的长度,并按步骤2切割柱子,连接到进样口。避免用力弯曲压挤毛细柱,并小心不要让标记牌等有锋利边缘的物品与色谱柱接触磨擦,以防柱身断裂或受损。将色谱柱正确地嵌入进样口后,用手把连接螺母拧上,用手拧紧后用扳手再拧1/4-1/2圈。
步骤4:接通载气
载气必须为高纯氮气(或氦气),纯度达99.999%,使用极性柱时(如FFAP、PEG-20M等),可以载气加脱氧管进一步脱氧,这样可延长柱子的使用寿命。
当色谱柱与进样口连接好后,接通载气。调节柱前压力以得到合适的载气流速。将色谱柱的另一端(空端),插入装有己烷的样品瓶中,正常情况下,我们可以看见瓶中稳定持续的气泡。如果没有气泡,就要重新检查一下载气装置和流量控制器等是否安装完全或设置正确,并检测一下整个气路有无泄漏。等所有问题解决后,将色谱柱端口从瓶中取出,擦试干净,保证柱端口无溶剂残留,再进行下一步安装。
步骤5:将色谱柱连于检测器上
其安装和所需注意的事项与以上色谱柱与进样口联接(步骤3)部分所讲述的大致相同。安装时要注意色谱柱末端要高于尾吹点,或按照色谱仪说明书安装。
步骤6:进行气体检漏
在色谱柱加热前,要对GC系统进行检漏。建议使用1:1的异丙醇/水的混合溶液进行检查。
步骤7:色谱柱的老化
色谱柱安装和系统检漏工作完成后,就可以对色谱柱进行老化了。将色谱柱程序升温至最高使用温度的30℃以下,恒温30分钟。这样柱子内吸附的组份会被吹出,以免影响您的分析。
最后,将色谱柱的温度降低至所需要的温度,即可进行实际样品的分析。
通用型反相液相色谱柱是一种常用的色谱柱产品,主要由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成,被广泛用于多个领域中。在通用型反相液相色谱柱的使用中,保持色谱柱的柱效、容量和渗透特性,延长柱子的使用寿命非常重要。使用时间后就会出现柱压升高、柱效降低、峰形畸变和分离度降低、保留时间改变等变化,如不采取措施,将会缩短色谱柱的使用寿命,影响工作效率,并造成一定的经济损失。
结构:
空柱由柱接头、柱管及滤片组装而成。
在两端柱接头内,柱管两端各放置一片不锈钢滤片(或滤网),用于封堵柱填料不被流动相冲出柱外而流失。空柱各组件均为316不锈钢材质,能耐受一般的溶剂作用。但由于含氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性,故使用时要注意,柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂,以避免腐蚀。
特点:
⑴由于新型高效微粒固定相填料的使用,分离能力高;
⑵由于液相色谱柱具有高效,并且流动相可以控制和改善分离过程的选择性,选择性高;
⑶检测灵敏度高;
⑷由于高压输液泵的使用,相对经典液相色谱,分析速度快。
另外,通用型反相液相色谱柱适用于分析高沸点不易挥发、受热不稳定、分子量大和不同极性的有机物,尤其是生物活性物质的天然产物和高分子化合物等。