液相色谱柱是实验室一种常用的色谱配件，也是液相色谱仪的必不可缺的一部分，那么，我们在做样品分析的时候，如果色谱柱出现柱子柱流失怎么办呢？下面为大家讲讲。
首先明白液相色谱柱柱流失是不可避免的。柱流失程度与什么因素有关?
1、柱流失程度与固定相种类和色谱柱规格有关，一般固定相的量越多，柱流失则相对较高。
2、柱流失与柱温以及载气中氧气的浓度有关。高温下，固定相的分解会加快，因此，高温时的流失会比低温时高。氧气是许多固定相分解的催化剂，特别是在高温时段，强调载气的纯度和液相色谱柱安装的气密性，一方面就是出于氧气会加剧柱流失的考虑。
3、此外，液相色谱柱随着使用次数和时间的增加，固定相的稳定性最终也会发生不可逆的变化，导致柱流失的增加。液相色谱柱柱流失严重情况多出现在进样的溶液类型，5MS的柱子是非极性的，当使用极性溶剂时，就会发生反应而导致大量柱流失，在做测试时一定要留意样品的性质。
在我们平常的工作当中，液相色谱柱的正确使用和维护十分重要，液相色谱柱使用是否得当，直接影响液相色谱柱的寿命，稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。
在液相色谱操作过程中，我们需要了解下面的问题，方便维护液相色谱柱。
1.柱子在装卸、更换时，动作要轻，接头拧紧要适度。必须防止较强的机械振动，以免柱床产生空隙。
2.如果仪器用来做常规分析，样品种类有限，但分析次数多，则不妨为每一类常规分析配置一根专用柱，这样有助于延长柱子的寿命。
3.避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的突然变化或者使液相色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况;柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调节流速时应该缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓。
4.应逐渐改变溶剂的组成，特别是反相色谱中，不应直接从有机溶剂改变为全部是水，反之亦然。
5.如使用柱温控制装置时，应注意在通人流动相后才能升温。
6.一般说来液相色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效。
7.选择使用适宜的流动相，以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前面连接一个预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”，避免分析柱中的硅胶基质被溶解。
8.避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注人柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一个保护柱。保护柱一般是填有相似固定相的短柱。保护柱可以而且应该经常更换。
9.经常用强溶剂冲洗液相色谱柱，清除保留在柱内的杂质。在进行清洗时，对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡，每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右，即常规分析需要50-75mL。
10.保存液相色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇，柱接头要拧紧，防止溶剂挥发干燥。绝对禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。
11.液相色谱柱使用过程中，如果压力升高，一种可能是烧结滤片被堵塞，这时应更换滤片或将其取出进行清洗；另一种可能是大分子进人柱内，使柱头被污染;如果柱效降低或色谱峰变形，则可能柱头出现塌陷，死体积增大。
12.在完成分离分析工作之后，不能马上就关机，需及时对色谱分析系统进行冲洗，一般0.5h以上，以除去液相色谱柱内的杂质。
液相色谱柱、特别是高效液相色谱柱的填装，需要有较高的技巧和熟练的技能。因此，有人甚至将“装柱”看作是“艺术加技术”。但是，只要掌握了一些基本的规律和方法，任何实验室都可以填装出具有较高柱性能的色谱柱。当然，目前大多数实验室多是购买商品预填装柱来满足分离、分析之需。但是在一些有特殊需要的情况下，或为节省经费，在实验室中自行填装高效液相色谱柱还是可取的。
液相色谱柱填装程序中应该注意的问题：
①高压操作的安全问题。常发生的问题是柱子与匀浆罐连接不牢，造成加压时柱头被高压冲下或柱子从匀浆罐上滑脱。此时，轻则填装失败，材料损失，重则造成人身伤害事故，一定要加以防范。除每次填装前均须仔细确认是否连接正确且牢靠外，可以还可加上由法兰盘和长螺杆组成的预防脱落装置，以防万一。
②通常，先填装的柱床较后填装的柱床紧密。因此，当使用时宜以相反的方向为宜，即让近匀浆罐一端作为使用时流动相的出口，而填装时的出口端则作为流动相的入口。
③新柱子使用前应以甲醇冲洗20-30min, 后，再改用流动相平衡。
④新柱子宜选适宜的标准样品进行评价并记录，以备存查和比较。
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