色谱分析是以假定给定组分的保留值在分离条件不变时保留值恒定为基础的。对标准的液相色谱程序而言，每个峰都对应于一个组分，以标准品与样品中组分的保留时间相对应进行鉴别。恒定的保留时间对分析设计排列的样品很重要。
在液相色谱仪分析中常涉及到组分的保留值。保留值发生改变可使已建立的方法不能继续进行下去，或引起分析周期太长，或者峰分不开。应该找出引起保留值变化的原因。
除上述条件之外，引起保留变化的原因主要包括下列3种：
1.柱-柱之间；
2.日-日或日内：保留时间可能随时间而变化，如温度、柱温、pH值等对柱性能有影响，通常是所有的峰提前或延迟。
3.样品-样品间：偶尔也有样品与标准品的保留时间不同，可能是样品介质的影响。
以下重点讨论造成日-日间和日内保留时间变化的影响因素，它们主要是：
a.分离条件控制差
除了色谱柱外，保留是温度、流动相组成和流速的综合体现，如果有一个条件变化，保留时间也会随之发生变化。
b.柱平衡慢
流动相组成或温度变化时，柱在新条件下再平衡需要一定的时间，在柱达到完全平衡钱不应进样。
c.柱钝化
长时间进样，柱会退化，强保留组分被柱不可逆的保留，导致所有组分保留减少。键合相层从填料微粒上剥落下来，会导致某些组分的保留增加，而另一组分的保留减少。
d.柱过载和样品介质相互作用
过大的样品量超出柱的线性范围，使保留减少。也可能是样品本身过载，从其它方面影响保留。
液相色谱柱，是一种用于液体色谱分析仪器的部件。那么我们该如何的去选择液相色谱柱呢?
下面我们就一起来看看吧。
在选择色谱柱之前，先多了解自己的样品和杂质，他们的类型结构、极性、酸碱性、分子量大小等等，液相色谱柱决定最终分离效果，所以在选择色谱柱时候有必要考虑清楚自己的需求。
首先液相色谱柱目前来说分为正反相色谱柱，正相有SI等，反相有C18等。正相主要分离极性物质，反相主要分离非极性物质，氨基柱等主要分离二者之间的。
明确了色谱柱大概功能之后，确认下自己样品信息，基本就有点眉目了，方向对了，剩下的事情就是细节了如：键合相、粒径、孔径、碳载量等
1.样品是极性的且弱酸性的;就可以选择C18在100%酸性水溶液条件下检测，即要选择承受100%纯水且对极性化合物保留很好的色谱柱
2.如果样品极性太强，或酸性太强;可以选择CN，NH2，或硅胶柱，HILIC(亲水色谱)，也有使用C18+强阴离子对试剂或强阴离子交换色谱柱(缺点是离子对试剂平衡时间长；
对流动相pH要求比较精密，否则很难重复实验，另外离子对试剂很难洗下来，基本上用了离子对的色谱柱就不能再用于其它实验)
3.若样品是碱性的;可选择高纯硅胶柱(高纯硅胶缺少金属杂质，且硅胶端基封尾)或一些经过修饰的C18柱(如极性嵌入技术或碱去活技术等)；
他们都会减少碱性化合物的拖尾，一般会选择中性或偏碱的条件下做，因为这样可增加碱性样品的保留
4.如果碱性化合物的极性太强，或碱性太强;可以选择宽pH的C18色谱柱在高pH值检测(优点是方法开发简单；
缺点是目前实现这一技术的色谱柱品牌比较少，价格也高)或者选用HILIC色谱柱(硅胶柱在反相条件下使用；
这也是很经典的检测碱性样品的方法)选择强离子交换柱(缺点是不能用来分析其它样品，对流动相pH要求比较精密，否则很难重复实验)也有使用C18+强阴离子对试剂或强阴离子交换色谱柱。
在高效液相色谱仪分析过程中，缓冲液是不可或缺的，因为要用它来调节流动相的pH值，缓冲盐使用不当，后果可是吃不了兜着走。比如说，液相色谱仪的色谱柱压升高、柱效下降、保留时间异常等等不良影响：
1、柱压升高；
原因：缓冲盐使用不当导致缓冲盐析出，堵塞塞板和键合相颗粒之间的孔隙，阻碍流动相传质，引起柱压升高。
2、相同化合物的保留时间发生变化；
原因：如果没有冲洗干净就进行进样，色谱柱内含有的盐会使化合物的保留时间发生变化.
3、柱效下降；
原因：
i、有些缓冲盐会渗入到键合相的深处，损害硅胶基体，导致色谱柱键合相流失，柱床变松，柱效下降；
ii、凝结在键合相表面，使C18碳链难以舒展，对物质的保留能力下降，导致柱效下降。因此液相色谱仪用过缓冲盐后需要对色谱柱进行冲洗，水中缓冲盐浓度较大时应特别引起注意。
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