1.进样系统一般采用隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作，进样量是恒定的。这对提高分析样品的重复性是有益的。
2.输液系统该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。高压泵的一般压强为l.47～4.4X107Pa，流速可调且稳定，当高压流动相通过层析柱时，可降低样品在柱中的扩散效应，可加快其在柱中的移动速度，这对提高分辨率、回收样品、保持样品的生物活性等都是有利的。流动相贮存错和梯度仪，可使流动相随固定相和样品的性质而改变，包括改变洗脱液的极性、离子强度、PH值，或改用竞争性抑制剂或变性剂等。这就可使各种物质(即使仅有一个基团的差别或是同分异构体)都能获得有效分离。
3.分离系统该系统包括色谱柱、连接管和恒温器等。色谱柱一般长度为10～50cm(需要两根连用时，可在二者之间加一连接管)，内径为2～5mm，由"优质不锈钢或厚壁玻璃管或钛合金等材料制成，住内装有直径为5～10μm粒度的固定相(由基质和固定液构成).固定相中的基质是由机械强度高的树脂或硅胶构成，它们都有惰性(如硅胶表面的硅酸基因基本已除去)、多孔性(孔径可达1000?)和比表面积大的特点，加之其表面经过机械涂渍(与气相色谱中固定相的制备一样)，或者用化学法偶联各种基因(如磷酸基、季胺基、羟甲基、苯基、氨基或各种长度碳链的烷基等)或配体的有机化合物。因此，这类固定相对结构不同的物质有良好的选择性。例如，在多孔性硅胶表面偶联豌豆凝集素(PSA)后，就可以把成纤维细胞中的一种糖蛋白分离出来。
另外，固定相基质粒小，柱床极易达到均匀、致密状态，极易降低涡流扩散效应。基质粒度小，微孔浅，样品在微孔区内传质短。这些对缩小谱带宽度、提高分辨率是有益的。根据柱效理论分析，基质粒度小，塔板理论数N就越大。这也进一步证明基质粒度小，会提高分辨率的道理。再者，高效液相色谱的恒温器可使温度从室温调到60C，通过改善传质速度，缩短分析时间，就可增加层析柱的效率。
高效液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、。分离系统、检测系统和数据处理系统，下面将分别叙述其各自的组成与特点。
1.进样系统一般采用隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作，进样量是恒定的。这对提高分析样品的重复性是有益的。
2.输液系统该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。
高压泵的一般压强为l。47～4。4X107Pa，流速可调且稳定，当高压流动相通过层析柱时，可降低样品在柱中的扩散效应，可加快其在柱中的移动速度，这对提高分辨率、回收样品、保持样品的生物活性等都是有利的。
流动相贮存错和梯度仪，可使流动相随固定相和样品的性质而改变，包括改变洗脱液的极性、离子强度、PH值，或改用竞争性抑制剂或变性剂等。
这就可使各种物质(即使仅有一个基团的差别或是同分异构体)都能获得有效分离。
3.分离系统该系统包括色谱柱、连接管和恒温器等。色谱柱一般长度为10～50cm(需要两根连用时，可在二者之间加一连接管)，内径为2～5mm，由"优质不锈钢或厚壁玻璃管或钛合金等材料制成，住内装有直径为5～10μm粒度的固定相(由基质和固定液构成)。
固定相中的基质是由机械强度高的树脂或硅胶构成，它们都有惰性(如硅胶表面的硅酸基因基本已除去)、多孔性(孔径可达1000?)和比表面积大的特点，加之其表面经过机械涂渍(与气相色谱中固定相的制备一样)，或者用化学法偶联各种基因(如磷酸基、季胺基、羟甲基、苯基、氨基或各种长度碳链的烷基等)或配体的有机化合物。
因此，这类固定相对结构不同的物质有良好的选择性。
例如，在多孔性硅胶表面偶联豌豆凝集素(PSA)后，就可以把成纤维细胞中的一种糖蛋白分离出来。
另外，固定相基质粒小，柱床极易达到均匀、致密状态，极易降低涡流扩散效应。基质粒度小，微孔浅，样品在微孔区内传质短。这些对缩小谱带宽度、提高分辨率是有益的。
根据柱效理论分析，基质粒度小，塔板理论数N就越大。这也进一步证明基质粒度小，会提高分辨率的道理。
再者，高效液相色谱的恒温器可使温度从室温调到60C，通过改善传质速度，缩短分析时间，就可增加层析柱的效率。
高效液相色谱仪是由储液器、泵、进样器、色谱柱、查看器、记录仪等几有些构成。储液器中的活动相被高压泵打入体系，样品溶液经进样器进入活动相，被活动相载入色谱柱（固定相、内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不一样的分配系数，在两相中作相对运动时，经过重复屡次的吸附-解吸的分配进程，各组分在移动速度上发生较大的不一样，被别离成单个组分顺次从柱内流出，经过查看器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱方式打印出来。
高效液相色谱仪常见故障解决方法：
故障1
活动相内有气泡，封闭泵，翻开泄压阀，翻开purge键，清洁脱气，气泡不断从过滤器冒出，进入活动相，不管翻开purge键几回，都无法清除不断发生的气泡。
因素过滤器长时刻沉浸于乙酸铵等缓冲液内，过滤器内部由于霉菌的成长繁衍，构成菌团，阻塞了过滤器，缓冲液难以流畅地经过过滤器，空气在泵的压力作用下经过滤器进入活动相。
处理过滤器浸泡于5%硝酸溶液中，超声清洁几分钟即可；亦可将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小时，悄悄震荡几回，再将过滤器用纯水清洁几回，翻开泄压阀，翻开purge键，清洁脱气，如仍有气泡不断从过滤器冒出，持续将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中，如没有气泡不断从过滤器中冒出，阐明过滤器内部的霉菌菌团已被硝酸损坏，活动相能够流畅地经过过滤器。翻开泄压阀，翻开泵，流速调至1.0～3.0ml/min，纯水冲刷过滤器1小时摆布。即可将过滤器清洁洁净。封闭泄压阀，纯甲醇冲刷半小时即可。
故障2
柱压高因素：缓冲液盐分如（乙酸铵等）堆积于柱内；样品污染堆积。
处理关于第一种状况先用40～50℃的纯水,低速正向冲刷柱子，待柱压逐步降低后，相应进步流速冲刷，柱压大幅度降低后，用常温纯水冲刷，之后用纯甲醇冲刷柱子30分钟；关于第二种状况，由样品的堆积导致污染的C18柱，和纯水反向冲刷柱子，然后换成甲醇冲刷，接着用甲醇+异丙醇（4+6）冲刷柱子（冲刷时刻的长短由样品污染的状况而定），再用换成甲醇冲刷，然后用纯水冲刷，最终甲醇冲刷正向冲刷柱子30分钟以上。
故障3
既无压力指示，又无液体流过[1>；。
泵密封垫圈磨损；很多气泡进入泵体。
处理关于第一种状况，替换密封垫圈；关于第二种状况，在泵作用的一起，用一个50ml的玻璃针筒在泵的出口处协助抽出空气。
故障4
压力动摇大，流量不稳定.
因素体系中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物，使得两者不能密封。
处理作业中留意调查活动相的量，确保不锈钢滤器沉入储液器瓶底，防止吸入空气，活动相要充沛脱气[2>；。如为单向阀和阀座之间夹有异物，拆下单向阀，放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洁.
故障5
出峰欠安，峰分叉。
因素色谱柱被污染；柱头填料陷落。
处理关于第一种状况，先用纯水反向冲刷柱子，然后换成甲醇冲刷，接着用甲醇+异丙醇（4+6）冲刷柱子（冲刷时刻的长短由样品污染的状况而定），再换成甲醇冲刷，然后用纯水冲刷，最终甲醇冲刷正向冲刷柱子30分钟以上。如冲刷后仍然出峰欠安，则考虑第二种状况。关于第二种状况,拧开柱头，查看柱填料是不是硬结或陷落。去掉硬结有些(污染的填料），装入新填料，滴一滴甲醇，填料下陷，再填，用与柱内径一样的顶端滑润的不锈钢杆压紧，再填平，滴甲醇，再压紧重复几回，直至装满填平；。柱头用甲醇冲刷洁净，擦净柱外壁的填料，拧紧柱头，用纯甲醇冲刷30分钟以上。
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