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缓冲盐不当使用对色谱柱有哪些影响及操作规程

时间：2020-04-25 来源：仪多多仪器网作者：仪多多商城

缓冲盐不当使用对色谱柱有哪些影响？

　　在色谱分析过程中常常需要使用缓冲盐来调节流动相的pH值，缓冲盐的不当使用对色谱柱可能造成柱压升高、柱效下降以及使化合物的保留时间发生变化等影响：
　　1、柱压升高；
　　原因：

缓冲盐使用不当导致缓冲盐析出，堵塞塞板和键合相颗粒之间的孔隙，阻碍流动相质，引起柱压升高。
　　2、相同化合物的保留时间发生变化；
　　原因：

如果没有冲洗干净就进行进样，色谱柱内含有的盐会使化合物的保留时间发生变化。
　　3、柱效下降；
　　原因：
　　1）有些缓冲盐会渗入到键合相的深处，损害硅胶基体，导致色谱柱键合相流失，柱床变松，柱效下降；
　　2）凝结在键合相表面，使C18碳链难以舒展，对物质的保留能力下降，导致柱效降。
　　因此用过缓冲盐后需要对色谱柱进行冲洗，水中缓冲盐浓度较大时应特别引起注意。

标签: 色谱柱

色谱柱缓冲盐不当使用对色谱柱有哪些影响？_色谱柱

液相色谱柱的操作使用

　　色谱柱在使用前，可以进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是较佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。
　　1、样品的前处理：
　　a、可以使用流动相溶解样品。
　　b、使用予处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。
　　2、流动相的配制：
　　液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：
　　a、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。
　　b、流动相具有一定惰性，与样品不产生化学反应(特殊情况除外)。
　　c、流动相的黏度要尽量小，以便在使用较长的分析柱时能得到好的分离效果；同时降低柱压降，延长液体泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。
　　d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器，可以使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
　　e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。
　　f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。
　　3、流动相流速的选择：
　　因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不同的流速可得到不同的柱效。对于一根特定的色谱柱，要追求较佳柱效，可以使用较佳流速。对内径为4.6mm的色谱柱，流速一般选择1ml／min，对于内径为4.0mm柱，流速0.8ml／min为佳。
　　当选用较佳流速时，分析时间可能延长。可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时，可适当增加甲醇或乙腈的含量)。