分光光度计计采用一个可以产生多个波长的光源,通过系列分光装置,从而产生特定波长的光源,光源透过测试的样品后,部分光源被吸收,计算样品的吸光值,从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。
分光光度计的光谱分布范围:
包括波长范围为400~760nm的可见光区和波长范围为200~400nm的紫外光区.不同的光源都有其特有的发射光谱,因此可采用不同的发光体作为仪器的光源.
钨灯的发射光谱:钨灯光源所发出的400~760nm波长的光谱,光通过三棱镜折射后,可得到由红,橙,黄,绿,蓝,靛,紫组成的连续色谱;该色谱可作为可见光分光光度计的光源.
氢灯(或氘灯)的发射光谱:氢灯能发出185~400nm波长的光谱,可作为紫外光光度计的光源.
物质的吸收光谱
(1)如果在光源和棱镜之间放上某种物质的溶液,此时在屏上所显示的光谱已不再是光源的光谱,它出现了几条暗线,即光源发射光谱中某些波长的光因溶液吸收而消失,这种被溶液吸收后的光谱称为该溶液的吸收光谱.不同物质的吸收光谱是不同的.因此根据吸收光谱,可以鉴别溶液中所含的物质.物质的吸收光谱
(2)当光线通过某种物质的溶液时,透过的光的强度减弱.因为有一部分光在溶液的表面反射或分散,一部分光被组成此溶液的物质所吸收,只有一部分光可透过溶液.入射光=反射光分散光吸收光透过光如果我们用蒸馏水(或组成此溶液的溶剂)作为"空白"去校正反射,分散等因素造成的入射光的损失,则:入射光=吸收光十透过光。
分光光度计中zui简单的和应用zui普遍的一种。它的特点是只有一条光束。通过交换参比和样品的位置,使其分别进入光路。
在参比(溶剂)进入光路时,调零。然后将样品进入光路的信号和参比信号进行比较,就可在显示器上读出样品的透过率和吸光度。
分光光度计的保养方法
1.若大幅度改变测试波长,需稍等片刻,等灯热平衡后,重新校正“0”和“100%”点。然后再测量。
2.指针式仪器在未接通电源时,电表的指针必须位于零刻度上。若不是这种情况,需进行机械调零。
3.比色皿使用完毕后,请立即用蒸馏水冲洗干净,并用干净柔软的纱布将水迹擦去,以防止表面光洁度被破坏,影响比色皿的透光率。
4.操作人员不应轻易动灯泡及反光镜灯,以免影响光效率。
5.1900型等分光光度计,由于其光电接收装置为光电倍增管,它本身的特点是放大倍数大,因而可以用于检测微弱光电信号,而不能用来检测强光。
否则容易产生信号漂移,灵敏度下降。针对其上述特点,在维修、使用此类仪器时应注意不让光电倍增管长时间暴露于光下;
因此在预热时,应打开比色皿盖或使用挡光杆,避免长时间照射使其性能漂移而导致工作不稳。
6.放大器灵敏度换挡后,必须重新调零。
7.比色杯的配套性问题。比色杯必须配套使用,否则将使测试结果失去意义。在进行每次测试前均应进行比较。
具体方法如下;分别向被测的两只杯子里注入同样的溶液,把仪器置于某一波长处,石英比色杯;220nm、700nm装蒸馏水,玻璃比色杯:
700nm处装蒸馏水,将某一个池的透射比值调至100%,测量其他各池的透射比值,记录其示值之差及通光方向;
如透射比之差在±0.5%的范围内则可以配套使用,若超出此范围应考虑其对测试结果的影响。
分光光度计由于在每个波长都需要变换参比和样品的位置,所以只能手动,不能扫描吸收光谱。
它的结构比较简单,使用也有一定限制,但如配置程序控制和打印装置,则对一些常规的定量测定还是比较适用的。
关于可见分光光度计的使用环境也有很多说法,当然了除了使用环境之外还有使用时的注意事项。
那么具体都有哪些呢?下面我们就来一起看看吧。
可见分光光度计的工作环境
1、仪器应该安放在干燥的房间内,环境温度为5°C~35C, 相对湿度不超过85%.
2、使用时放置在坚固平稳的工作台上,且避免强烈的震动或持续的震动。
3、室内照明不易太强,且避免直射日光的照射。
4、电扇不易直接向仪器吹风,以免因气流影响仪器的正常使用。
5、尽量远离高强度的磁场、电厂及发生高频波的电器设备。
6、工作电压为AC220V土22V,频率为50Hz土1Hz
7、避免在有硫化氢、亚硫酸氟登腐蚀气体的场所使用。
可见分光光度计使用注意事项
1、当仪器停止工作时,应关闭仪器电源开关,在切断电源。
2、为了避免仪器积灰和沾污,在停止工作的时间里,用防尘罩罩住仪器,同时在罩子内放置数袋防潮剂,以免灯室受潮、反射镜镜面发霉或沾污,影响仪器日后的工作。
3、仪器工作数月或搬动后,要检查波长准确度,以确保仪器的使用和测定精度。
4、每次使用仪器后应对比色架进行清洁,防止样品对比色皿架的腐蚀。
紫外可见分光光度计使用环境温度尽可能保持在15-30摄氏度,这样才能保持电器元件稳定工作,且不易老化,从而使分光光度计不易损坏,灯源的使用寿命更久。
如果不具备这样的室温条件,即在高温的情况下,也要尽量缩短分光光度计开机时间,从而高效使用分光光度计,避免电器元件长期在高温下运转。如在低温下,使预热时间比常温下的预热时间要长,这样才能保证在仪器稳定的情况下进行测试使用;
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