高效液相色谱分析仪可以完成二元高压梯度洗脱，也可以拓展为制备系统，采用高压混合器连接两个高压恒流泵，利用RS232通讯，即可实现梯度分析;便于用户自由选择与搭配，混合器材主要由不锈钢、生物惰性PEEK等构成，用途广泛;可广泛应用于研究开发、医药检验、食品检测、化工分析、环境监测等众多分析领域，在使用过程中常会出现一些影响分析结果的问题，如果使用人员了解常见问题及其成因和相关解决方法，就能做到早预防勤维护，使分析结果保持较好的稳定性与较高的精确性。为此，仪多多网通过跟实验技术
人员沟通，整理了如下9个高效液相色谱仪的常见问题处理方法，可供参考!
一、气泡溢出问题解决方法
流动相内有气泡，关闭泵，打开泄压阀，打开purg键，清洗脱气，气泡不断从过滤器冒出，进入流动相，无论打开purge键几次，都无法清除不断产生的气泡。原因过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内，过滤器内部由于霉菌的生长繁殖，形成菌团，阻塞了过滤器，缓冲液难以流畅地通过过滤器，空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动相。处理过滤器浸泡于5%硝酸溶液中，超声清洗几分钟即可;亦可将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中12~36小时，轻轻震荡几次，再将过滤器用纯水清洗几次，打开泄压阀，打开purge键清洗脱气，如仍有气泡不断从过滤器冒出，继续将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中，如没有气泡不断从过滤器中冒出，说明过滤器内部的霉菌菌团已被硝酸破坏，流动相可以流畅地通过过滤器。打开泄压阀，打开泵，流速调至1.0~3.0ml/min,纯水冲洗过滤器1小时左右。即可将过滤器清洗干净。关闭泄压阀，纯甲醇冲洗半小时即可。
二、色谱柱平衡问题解决方法
如果我们观察到保留时间漂移，首先应考虑色谱柱是否已用流动相完全平衡。通常平衡需要10~20个柱体积的流动相。但如果在流动相中加入少量添加剂则需要相当长的时间来平衡色谱柱。需要柱子的充分平衡，然后才能对HPLC进行检定。
三、柱压高相关问题解决方法
1、缓冲液盐分如(乙酸铵等)沉积于柱内。
2、样品污染沉积。
处理对于第一种情况先用40~50℃的纯水，低速正向冲洗柱子，待柱压逐渐下降后，相应提高流速冲洗，柱压大幅度下降后，用常温纯水冲洗，之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟;对于第二种情况，由样品的沉积引起污染的C18柱，和纯水反向冲洗柱子，换成甲醇冲洗，接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子，再用换成甲醇冲洗，然后用纯水冲洗，最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。
四、无指示相关问题解决方法
1、泵密封垫圈磨损。
2、大量气泡进入泵体。
处理对于第一种情况，更换密封垫圈;对于第二种情况，在泵作用的同时，用一个50ml的玻璃针筒在泵的出口处帮助抽出空气。
五、不稳定相关问题解决方法
原因系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物，使得两者不能密封。处理工作中注意观察流动相的量，保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底，避免吸入空气，流动相要充分脱气。如为单向阀和阀座之间夹有异物，拆下单向阀，放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗。
六、峰分叉相关问题解决方法
1、色谱柱被污染。
2、柱头填料塌陷。
处理对于第一种情况，先用纯水反向冲洗柱子，然后换成甲醇冲洗，接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定)，再换成甲醇冲洗，然后用纯水冲洗，最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。如冲洗后依然出峰不佳，则考虑第二种情况。对于第二种情况，拧开柱头，检查柱填料是否硬结或塌陷。去除硬结部分(污染的填料)，装入新填料，滴一滴甲醇，填料下陷，再填，用与柱内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧，再填平，滴甲醇，再压紧反复几次，直至装满填平。柱头用甲醇冲洗干净，擦净柱外壁的填料，拧紧柱头，用纯甲醇冲洗30分钟以上。
七、重复性差相关问题解决方法
1、进样阀漏液。
2、加样针不到位。
3、液量不足。
处理对于第一种情况更换进样阀垫圈;对于第二种情况保证加样针插到底，注射样品溶液后须快速、平稳地从LOAD状态转换到INJECT状态，以保证进样量的准确。日常工作中，液相色谱仪的保养非常重要，注意不要让空气进入输液系统和高压泵中，储液器内的溶液如长时间未用应清洗储液器并更换溶液，每次用完色谱仪后缓冲液要用纯水冲洗干净，防止无机盐析出或沉积;样品的前处理也很重要，任何样品都要尽可能地去除杂质，完全溶解，尽量减少对色谱柱的污染，以延长色谱柱的使用寿命，同时避免注射过浓的样品溶液，以免残留液在进样阀内析出固体引起堵塞;色谱柱作好标记，用于不同分析目的的色谱柱不要混用等。
八、基线漂移相关问题解决方法
一般说来，机器刚起动时，基线容易漂移，大概要半个小时的平衡时间，如果你用了缓冲溶液或缓冲盐，还有就是在低波长下(220 nm)平衡时间相对会比较长，但如果你在实验过程中发现基线漂移，则你要考虑下面的原因：
1、柱温波动
解决方法：控制好柱子和流动相的温度，检查是否有打开的窗户或空调对着柱温箱。
2、流通池被污染或有气体。
解决方法：用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池(可以断开柱子)。如有需要，可以用1N的硝酸(不要用盐酸)。
3、紫外灯能量不足。
解决方法：更换新的紫外灯。
4、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成。
解决方法：检查流动相的组成，使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂;
5、样品中有强保留的物质(高K’值)以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。
解决方法：使用保护柱，如有必要，在进样之间。在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子;
6、)检测器没有设定在最大吸收波长处。解决方法：将波长调整至最大吸收波长处;
7、流动相的PH值没有调节好。解决方法：加适量的酸或碱调至较佳PH值。
九、峰面积差别很大相关问题解决方法
1、调换一根新色谱柱，如果情况一样，则排除柱子的原因。
2、将在线过滤器拆下，用超声波清洗，如果结果一样，说明与在线过滤器无关。
3、考虑是不是进样阀有问题或者定量环堵。建议多进几针样品，看是否有规律，如果没有规律，应检查一下进样器的其他部位，如果是进样器系统出现问题，应尽快解决之。
4、对进样器清洗一下，清洗干净后先进一针空白，再进样，看看结果如何，如果有明显减少，那可能是进样器污染，有样品残留在进样阀体内，在切换的过程中被流动相带入色谱柱。
5、考虑样品溶液是否均匀。建议同一个浓度连续进样5次，看一下结果如何变化，有没有规律;如果是样品溶液不均匀，可以再搅拌一下。
6、考虑光源是不是正常。
7、考虑浓度是否在线性范围内。有时候定量时浓度太高或太低都会产生较大的分析误差。
8、考虑取样方式是否正确，每次取样后是否对针头外面的附着液进行清除。
9、高效液相色谱仪的计算机软件编制可能存在问题。对比可以适当改变软件。
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