高效液相色谱仪分析中，选择流动相时应考虑流动相与填料的作用、纯度、与检测器的匹配、粘度、对样品的溶解度和样品回收等方面。
1、流动相与填料的作用：
流动相应不改变填料的任何性质。
低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。
碱性流动相不能用于硅胶柱系统。
酸性流动相不能用于氧化铝和氧化镁等吸附剂的柱系统。
2、纯度：
色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。
3、与检测器的匹配：
当使用UVD时，所用流动相在检测波长下应没有吸收或吸收很小。
当使用RID时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。
4、粘度：
高粘度溶剂会影响溶质的扩散和传质，使柱效降低，还会使柱压增加，分离时间延长。尽量选择沸点在100℃以下的流动相。
5、对样品的溶解度：如果溶解度欠佳，样品会在色谱柱内沉淀，不但影响纯化分离，而且会使色谱柱恶化。
6、样品回收：应选用挥发性溶剂。
高效液相色谱仪分析选择流动相时应注意的问题：
1.尽量使用高纯度溶剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。不纯的溶剂会引起基线不稳，产生伪峰。
2.避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降和损坏色谱柱，如使固定液溶解流失和酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。
3.样品在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。
4.流动相粘度低（粘度适中）。若使用高粘度溶剂，会增高压力，不利于分离。常用低粘度溶剂有丙酮、甲醇和乙腈等。但粘度过低的溶剂也不宜采用，如戊烷等，它们容易在色谱柱和检测器内形成气泡，影响分离。
5.化学稳定性好。
6.流动相应满足检测器的要求。
对于紫外吸收检测器，应注意选用检测器波长比溶剂的紫外截止波长长。所谓溶剂的紫外截止波长是指当小于截止波长的辐射通过溶剂时，溶剂对此辐射产生强烈吸收，此时溶剂被看作是光学不透明的，会严重干扰组分的吸收测量。
对于示差折光检测器，要求选择与组分折光率有较大差别的溶剂作流动相，以达到zui高灵敏度。
液相色谱仪，看你分离的样品的种类，看流动相是否和样品互溶，分离程度，一般加水多少，甲醇，乙腈很多种，看样品的沸点，溶解性。
高效液相色谱仪分析中进样基线很好，保留时间能锁定，压力也稳定，但是峰面积差别很大，大概有2倍的差别，这种情况出现的原因可能是多方面的，建议采用以下方法解决：
1、调换一根新色谱柱，如果情况一样，则排除柱子的原因。
2、将在线过滤器拆下，用超声波清洗，如果结果一样，说明与在线过滤器无关。
3、考虑是不是进样阀有问题或者定量环堵。建议多进几针样品，看是否有规律，如果没有规律，应检查一下进样器的其他部位，如果是进样器系统出现问题，应尽快解决之。
4、对进样器清洗一下，清洗干净后先进一针空白，再进样，看看结果如何，如果有明显减少，那可能是进样器污染，有样品残留在进样阀体内，在切换的过程中被流动相带入色谱柱。
5、考虑样品溶液是否均匀。建议同一个浓度连续进样5次，看一下结果如何变化，有没有规律；如果是样品溶液不均匀，可以再搅拌一下。
6、考虑光源是不是正常。
7、考虑浓度是否在线性范围内。有时候定量时浓度太高或太低都会产生较大的分析误差。
8、考虑取样方式是否正确，每次取样后是否对针头外面的附着液进行清除。
9、高效液相色谱仪的计算机软件编制可能存在问题。对比可以适当改变软件。
一、样品预处理的重要性：
1、样品预处理所用时间远大于色谱分离时间。
2、消耗大量的溶剂和其它化学品，占分析消耗总成本最大。
3、样品预处理是实验的重复性和准确性最差的环节，是影响实验结果好坏的重要因素。
二、样品预处理的目的：
1、除去微粒，减少干扰杂质。
2、浓缩微量组分。
3、提高检测的选择性和灵敏度。
4、改善分离效果。
5、有利于色谱柱和仪器的保护。
6、使样品形式和所用溶剂符合HPLC的要求。
三、样品预处理达到的要求：
1、样品全部转化为低浓度溶液。
2、样品溶液洗脱强度低于流动相，与流动相相溶。
四、样品预处理的原则：
1、在样品预处理过程中，尽可能防止和避免与待测组分发生化学反应。
2、在样品预处理过程中，如果与待测组分进行化学反应，那么这一反应必须是已知的，而且可以定量的完成。
3、在样品预处理过程中，要防止和避免待待测组分被玷污，尽可能减少无关化合物引入制备过程。
4、样品的处理过程应尽可能简单易行，所采用的样品处理装置尺寸应与样品处理量相适应。
5、采样之后应尽可能快的进行样品的分析测定，或使用合适的方法消除可能的变化和干扰。
五、样品预处理方法：
1、过滤、离心：
常用的滤膜材质有纤维素、聚四氟乙烯和聚酰胺。其中聚酰胺应用广泛。
2、加速溶剂萃取：
加速溶剂萃取是在提高温度（50～200℃）和压力（10.3～20.6MPa）下，用溶剂萃取固体或半固体样品。
3、超临界流体萃取：
超临界流体萃取是利用超临界流体对物质的特殊溶解性能原理而建立的萃取方法。
4、固相萃取：
固相萃取是通过采用选择性吸附和选择性洗脱对样品进行富集、分离和净化，可以将其近似地看作一种简单的液固色谱过程。
5、固相微萃取：
固相微萃取是基于涂敷在纤维上的高分子涂层或吸附剂和样品之间的吸附－解吸平衡原理，集采样、萃取、浓缩和进样于一体的无溶剂的样品微萃取方法。
有直接固相微萃取、顶空固相微萃取、膜固相微萃取和毛细管固相微萃取等。
6、液相微萃取：
液相微萃取是基于样品和微升级甚至纳升级有机溶剂之间的分配平衡原理，集采样、萃取和浓缩于一体的环境友好的样品微萃取方法。
有直接液相微萃取、中空纤维液相微萃取和顶空液相微萃取等。
7、衍生化：
有紫外衍生化、荧光衍生化和电化学衍生化等。
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