液相色谱仪作为分析实验室高端必备仪器之一,是实验室分析员应用频率较高的仪器,纵然是经常使用的经验丰富的老司机在使用过程里不可避免的还是往往疏忽一些问题,从而导致一些仪器的故障。方便快速的分析过程固然重要,但是为了多种样品而忽略了一些细节步骤,总是会犯些错。在使用液相色谱仪时四大关键因素,对正确使用极为重要,下面给大家说说:
1、液相色谱仪本身:
对于仪器本身一般不会有问题,特别是刚买回来的新仪器。对于仪器本身重要的就是仪器的校验,刚买回来的仪器一般都是由卖家先对仪器做系统的确认工作(包括IQ、PQ、OQ),确认顺利通过后,再请国家或省级仪器检定局的来校验,检定合格后就可以放心使用了,除此之外,一些做得好的公司每半年会对仪器进行一次的内部校验,目的就是为了保证仪器的正常可运行状态。
2、色谱条件:
色谱条件一般包括流动相、色谱柱、检测波长、流速及进样量。
流动相就涉及到配制流动相所用到的水和试剂试液,水一般要求用超纯水或其他水的电阻率不大于18、2兆欧级别,试剂试液要求用色谱级别的,原因为防止水和试剂试液中的杂质对色谱结果的干扰。
色谱柱会因不同的品种而有不同的要求,但每根色谱柱都有它的清洗要求,这个在色谱柱说明书上都可以找到,一定要根据上面的要求进行,否则会造成色谱柱效下降和色谱柱的使用寿命缩短,检测波长也会因品种的不同有不同的要求,这里需要指出的是要注意观察检测器氘灯能量的变化,比如基线波动大,活性成分的响应值突然变小等,都有可能是氘灯的能量不足所引起的,氘灯一般建议使用800小时,但实际上使用时间不止,可根据实际情况更换。
流速也因品种的不同而不同,一般为1、0ml/min,流速是不可随意改动的,特别是作为QC人员,但是作为研发人员,有时为了摸索条件或进行方法耐用性验证,会对流速进行改变以评价方法的适用性。对于进样量因不同的品种也有不同规定,如果使用六通阀自动进样,一般进样精密度都很好,不需强调什么。
3、操作人员:
首先,作为液相色谱仪操作人员,一定要认真学习液相的说明书,掌握液相硬件和软件的操作,掌握日常的维护保养,掌握最基础故障的排除和维修。
一般液相色谱仪的操作规程也是有操作人员起草的,所以只要严格按照操作要求进行操作,一般不会出现问题,当然这里需要特别指出的是对于液相的日常维护保养很重要,比如流动相的过滤、脱气、泵密封垫的清洗、系统管路的清洗、溶剂过滤头的清洗等,倘若不坚持,很容易导致色谱柱堵塞、系统压力过强、色谱峰异常等不必要的故障,浪费时间。
其次,操作人员在配制液相色谱仪分析用待测样品溶液时,由同一个人单独完成,以免不必要的偶然误差从而造成分析的失败或误差。
4、液相安装环境:
液相色谱仪应尽量安装于水平、远离振动、电磁干扰的屋内的台面上,有条件的话尽量将液相数据处理系统分隔开,一个是防止色谱基线噪音偏大,基线不稳等,一个是为减少对人体的危害。
色谱法是一种常见的分离技术,其原理是利用欲分离组分在两相间具备不同的分配系数,以流动相对固定相中的混合物进行洗脱,混合物中的不同物质以不同速度沿固定相移动,最终达到分离的效果。
按两相的物理状态,可以分为气相色谱法(GC)和液相色谱法(LC),在现代样品分析中,气相色谱和液相色谱都是普遍采用的分析方法,但两者也存在许多不同之处,具备不同的特性,这些特性也决定了它们不同的应用范围。
一、气相色谱仪与液相色谱仪的主要差异
1.流动相区别
GC:流动相为惰性气体,流动相与组分无亲合作用力,只与固定相有相互作用。
LC:流动相为液体,流动相与组分间有亲合作用。
2.色谱柱长度区别
GC:色谱柱长度在几米到几十米不等。气相色谱由于载气的相对分析量较低,分子间隙大,故粘度低,流动性好,组分在气相中流动速度快,因此可以增加柱长,以提高柱效。
LC:色谱柱通常在几十到几百毫米。
3.分析样品选择性
GC:相对分子质量较小(一般小于1000),低沸点(一般小于500℃),易挥发,热稳定性。
LC:更适用于分析高沸点,难挥发,热稳定性差,分子质量较大(1000--2000)的液体化合物。
据统计,气相色谱能分析的有机物只占全部有机物的15%-20%,其可分析样品的范围小于液相色谱,但随着近几年技术的更新,如顶空进样和裂解进样等,进一步扩大了气相色谱的分析范围。
4.检测器差异
GC:氢火焰离子化检测器(FID),热导检测器(TCD),电子捕获检测器(ECD),火焰光度检测器(FPD),氮磷检测器(NPD)。
LC:紫外检测器,荧光检测器,示差折光检测器。
5.其他方面
GC:需要将样品在气化室气化,需要较高的检测温度,采用尖头进样针。
LC:不必对样品气化,常温即可检测,采用平头进样针。
二、GC与LC的主要相同点
基础的原理相同,都是吸附-脱附平衡,利用组分在固定相和流动相中的分配系数不同达到分离的目的。也就是说,两者都是利用物质在流动相和固定相中的分配系数的差别,从而在两相间反复多次(1000-1000000次,甚至更多)的分配,使原来分配系数差别很小的各组分分离开来。在本质上,都是利用“相似相溶”原理,利用色谱柱进行分离。
气相色谱具有分离效率高,分离速度快,样品用量少,选择性好,检测灵敏度高等特点,在食品、环境、化工等领域都具有广泛的用途;液相色谱分析范围广,对于难分离混合物的分析具有很好的准确性,样品回收容易,因此液相色谱不仅仅作为一种分析方法,也作为一种分离手段应用在食品医药等行业。
随着应用领域的不断深入,单一的色谱分析技术已经不能完全满足现有的市场需求,所以诞生了气相色谱串联质谱(GCMS)、液相色谱串联质谱(LCMS)等新的分析技术,用于更好地分离分析样品。
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