高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。与经典的液相色谱相比，具有高效液相所用的固定相粒度小（5um-10um）、传质快、柱效高的优势。近年来，在保健食品功效成分、营养强化剂、维生素类、蛋白质的分离测定等应用广泛。世界上约有80％的有机化合物可以用HPLC来分析测定。
高效液相色谱的分离过程HPLC，借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。
高效液相色谱仪操作步骤：
1)过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。
2)对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3)打开HPLC工作站(包括计算机软件和色谱仪)，连接好流动相管道，连接检测系统。
4)进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。
5)一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10ml/min。
6)调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。
7)设计走样方法。点击file，选取selectusersandmethods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击newmethod。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。
8)进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。
9)关机时，先关计算机，再关液相色谱。
液相色谱仪是一种常见的色谱分析方法，与气相色谱相比液相色谱可以在常温中操作，且不受样品挥发度和热稳定性的限制。
这使得液相色谱非常适合相对分子量较大，难汽化；
不易挥发或对热敏感的物质、离子型化合物和高聚物的分离分析。
然而要选购一台品质优良的液相色谱并不容易。
液相色谱仪的指标很多，有关于泵的、关于检测器的、关于色谱柱的……不过，从选购角度考虑；
可以优先考虑噪音、漂移、最小检测浓度、定性定量重复性等主要技术指标。
当然，这些指标都要放在系统、回路里去看去比较。
1.噪音
噪音指由仪器的电器元件、温度波动、电压的线性脉冲以及其他非溶质作用产生的高频噪声和基线的无规则波动产生的声音。
噪音的大小直接关系到仪器的检测灵敏度，噪音越大检测的灵敏度就越低。
对于检测低含量的样品就要求仪器的噪音越小越好，否则噪音过大将会导致基线不稳，甚至影响分析结果；
2.最小检测浓度(最小检测限)
最小检测浓度是反映仪器灵敏度的重要参数。
根据公式CL=2×Nd×C/H(CL：最小检测浓度Nd：噪音C：样品浓度最小检测浓度H：样品峰高)；
最小检测浓度是和噪音成正比的，噪音越大，最小检测浓度就越大，灵敏度就越低。
如果选购的仪器回避了这个指标，说明他们不愿在最小检测浓度的基础上去比较噪音；
3.漂移
漂移是指仪器稳定后一段时间内基线漂离原点的距离，通常用来衡量仪器稳定快慢。
高品质的仪器能在较短的时间内达到稳定，从而在一定程度上提高分析效率；
4.定性定量重复性
主要是考核仪器稳定性的指标，这对于分析样品来说是非常重要的。
好的仪器其稳定性应该是十分不错的，这就要求多次进样保留时间及含量的一致性，这样做出来的结果才能使人信服。
虽然这些指标都属于检测器，但是就像前面所说的，条件是要放在整个回路和系统里去看去比较。
例如：泵的脉动会直接影响噪音指标、泵的流量准确度指标，以及密封性不好也会影响相关指标。
所以要系统地看指标才可以反应出仪器的一些真实水平。
下一篇：恒温水浴的操作使用及注意事项
449717568