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液相色谱仪使用注意事项及维护及解决方案

时间:2020-05-10    来源:仪多多仪器网    作者:仪多多商城     
  【中国仪器网 维修保养】液相色谱,是色谱法的一个重要分支,以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,在柱内各成分被分离后,进入检测器进行检测,从而实现对试样的分析。
  

  使用注意事项
  
  1.流动相必须用HPLC级的试剂,使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。
  
  2.流动相过滤后要用超声波脱气,脱气后应该恢复到室温后使用。
  
  3.不能用纯乙腈作为流动相,这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。
  
  4.使用缓冲溶液时,做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时,然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上,以充分洗去离子。对于柱塞杆外部,做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。
  
  5.长时间不用仪器,应该将柱子取下用堵头封好保存,注意不能用纯水保存柱子,而应该用有机相(如甲醇等),因为纯水易长霉。
  
  6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。
  
  7.C18柱不能进蛋白样品,血样、生物样品。
  
  8.堵塞导致压力太大,按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗。清洗方法;①以异丙醇作溶剂冲洗:②放在异丙醇中间用超声波清洗;⑧用10%稀硝酸清洗。
  
  9.气泡会致使压力不稳,重现性差,所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。
  
  10.如果进液管内不进液体时,要使用注射器吸液:通常在输液前要进行流动相的清洗。
  
  11.要注意柱子的pH值范围,不得注射强酸强碱的样品,特别是碱性样品。
  
  12.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗,然后插入新的流动相中。更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。
  
  液相色谱仪的维护
  
  1.HPLC的日常操作条件:温度:10—30℃;相对湿度《80%;是恒温、恒湿,远离高电干扰、高振动设备。
  
  2.泵的保养:
  
  1)使用流动相尽量要清洁;
  
  2)进液处的沙芯过滤头要经常清洗;
  
  3)流动相交换时要防止沉淀;
  
  4)避免泵内堵塞或有气泡;
  
  3.进样器的保养:
  
  1)每次分析结束后,要反复冲洗进样口,防止样品的交叉污染;
  
  4.柱的保养:
  
  1)柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动;
  
  2)当柱子和色谱仪联结时,阀件或管路一定要清洗干净;
  
  3)要注意流动相的脱气;
  
  4)避免使用高粘度的溶剂作为流动相;
  
  5)进样样品要提纯;
  
  6)严格控制进样量;
  
  7)每天分析工作结束后,要清洗进样阀中残留的样品;
  
  8)每天分析测定结束后,都要用适当的溶剂来清洗柱;
  
  9)若分析柱长期不使用,应用适当有机溶剂保存并封闭;
  
  5.检测器(UV)的保养:
  
  1)紫外灯的保养:在分析前、柱平衡得差不多时,打开检测器;在分析完成后,马上关闭检测器。
  
  2)样品池要保养。

有关液相色谱仪的系统组成介绍

    液相色谱仪系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。


    储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相;


    被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数;


    在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别;


    被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪;


    数据以图谱形式打印出来高效液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统;


    下面将分别叙述其各自的组成与特点。


    进样系统


    一般采用隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作,进样量是恒定的。


    这对提高分析样品的重复性是有益的。


    输液系统


    该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。


    高压泵的一般压强为47~44X10Pa,流速可调且稳定,当高压流动相通过层析柱时;


    可降低样品在柱中的扩散效应,可加快其在柱中的移动速度;


    这对提高分辨率、回收样品、保持样品的生物活性等都是有利的。


    流动相贮存器和梯度仪,可使流动相随固定相和样品的性质而改变;


    包括改变洗脱液的极性、离子强度、PH值,或改用竞争性抑制剂或变性剂等。


    这就可使各种物质(即使仅有一个基团的差别或是同分异构体)都能获得有效分离。


    分离系统


    该系统包括色谱柱、连接管和恒温器等。


    色谱柱一般长度为10~50cm(需要两根连用时,可在二者之间加一连接管);


    内径为2~5mm,由"优质不锈钢或厚壁玻璃管或钛合金等材料制成;


    住内装有直径为5~10μm粒度的固定相(由基质和固定液构成)。


    固定相中的基质是由机械强度高的树脂或硅胶构成;


    它们都有惰性(如硅胶表面的硅酸基因基本已除去)、多孔性(孔径可达1000?)和比表面积大的特点;


    加之其表面经过机械涂渍(与气相色谱中固定相的制备一样);


    或者用化学法偶联各种基因(如磷酸基、季胺基、羟甲基、苯基、氨基或各种长度碳链的烷基等)或配体的有机化合物。


    因此,这类固定相对结构不同的物质有良好的选择性。


    例如,在多孔性硅胶表面偶联豌豆凝集素(PSA)后,就可以把成纤维细胞中的一种糖蛋白分离出来。


    另外,固定相基质粒小,柱床极易达到均匀、致密状态,极易降低涡流扩散效应。


    基质粒度小,微孔浅,样品在微孔区内传质短。这些对缩小谱带宽度、提高分辨率是有益的。


    根据柱效理论分析,基质粒度小,塔板理论数N就越大。


    这也进一步证明基质粒度小,会提高分辨率的道理。


    再者,高效液相色谱的恒温器可使温度从室温调到60C;


    通过改善传质速度,缩短分析时间,就可增加层析柱的效率。

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液相色谱仪 有关液相色谱仪的系统组成介绍_液相色谱仪

液相色谱仪维护应该注意的事项

    液相色谱仪根据固定相是液体或是固体,又分为液-液色谱及液-固色谱。现代液相色谱仪由高压输液泵、进样系统、温度控制系统、色谱柱、检测器、信号记录系统等部分组成。与经典液相柱色谱装置比较,具有高效、快速、灵敏等特点。
    1、 泵。
    泵是液相色谱仪的心脏。处于良好工作状态的泵,基线平稳,保留时间重现性好,梯度洗脱时压力变化缓慢而且平稳。
    1)选择优质的溶剂和试剂,在进入仪器前用 0.45um 膜过滤,并进行脱气处理。
    2)泵开始使用时,一定要用合适的流动相彻底清洗干净。
    3)定期检查并更换在线过滤片及有关的垫圈,经常清洗进液处的微孔滤头。
    4)改变流动相时,应注意沉淀的产生,以防止泵堵塞。
    2、色谱柱。
    色谱柱是化合物分离的关键。保养良好的色谱柱具有很高的塔板数,基线平稳。
    1)色谱柱比较娇气不能够碰撞、弯曲或强烈震荡;安装时要保证阀件或管路的清洁。
    2)流动相在使用前必须进行脱气处理,尽量不使用或少使用高粘度的流动相。
    3)在满足灵敏度的前提下,尽可能的使用小进样量。如果样品比较脏,要进行净化或提纯处理。
    4)分析结束后要清洗掉进样阀中残留的样品,并用流动相或适当的溶剂清洗色谱柱。
    5)如长期不用,用适当的有机溶剂保存并封闭或定期补充合适的流动相。
    3 、检测器
    分析完成后,马上关闭检测器。
    4 、进样器
    分析结束后反复冲洗进样口,防止样品的交叉污染或堵塞。

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