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液相色谱柱的常见问题与解决方法及解决方案

时间：2020-05-10 来源：仪多多仪器网作者：仪多多商城

　　【仪器网维修保养】液相色谱柱在使用过程中常见的问题有柱压升高、峰拖尾变宽、分离效果下降等。一般情况下这些都是色谱柱使用时间过长引起的正常现象，只需对色谱柱进行清洗与再生便可解决。但是如果柱压突然升高，则需要检查色谱柱是否出现问题。可能的原因有以下几点：

　　1.柱头的过滤筛板被污染

　　解决方法：卸下柱头螺丝，将过滤筛板取下，放置在30%左右的稀硝酸中，然后用超声波清洗10分钟。再将过滤筛板放入超纯水，超声清洗约10分钟，之后将过滤筛板重新装回色谱柱。

　　2.填料被污染

　　解决方法：

　　①卸下柱头螺丝，将前端被污染的填料用专用小匙挖出，然后重新填入相同的填料。

　　②选择合适的流动相，按色谱柱使用的方向冲洗，冲洗量须大于色谱柱体积的20倍，将污染物溶解并冲出色谱柱，然后，按照色谱柱标明的箭头方向使用。

　　3.缓冲盐溶液遇到纯有机相析出盐结晶，堵塞色谱柱

　　解决方法：先用冲洗色谱柱，将盐晶体溶解并冲出色谱柱，然后换高浓度甲醇水溶液或其他有机溶剂作为流动相。

　　4.流动相的PH值偏差过大，造成固定相溶解或结构被破坏

　　解决方法：此时很难将色谱柱修复通常需要直接更换色谱柱。

高效液相色谱仪常见问题及解决方法

　　高效液相色谱仪作为一种高精密仪器，如果在使用过程中不按照正确操作的话，就容易导致一些问题。其中常见的有柱压问题、漂移问题、峰型异常问题。

　　一、液相色谱仪压力过低压力过低的现象一般是由于系统泄漏，处理方法：寻找各个接口处，特别是色谱柱两端的接口，把泄漏的地方旋紧即可。当然还有一个原因就是泵里进了空气，但此时表现的往往是压力不稳，忽高忽低，更严重一点会导致泵无法吸上液体。处理方法：打开Purge阀，用3~5ml/min的流速冲洗，如果不行，则要用专用针筒在排空阀处借住外力将气泡吸出。
　　二、液相色谱仪柱压问题柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要密切注意的地方，柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值而是指压力波动范围在50PSI之间（在使用梯度洗脱时，柱压平稳缓慢的变化是允许的）。压力过高、过低都属于柱压问题。
　　三、液相色谱仪压力过高这是高效液相在使用中常见的问题，指的是压力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的原因。此时，我们应该分段进行检查。
　　（1）.首先断开真空泵的入口处，此时PEEK管里充满液体，使PEEK管低于溶剂瓶，看液体是否自由滴下，如果液体不滴或缓慢滴下，则是溶剂过滤头堵塞。处理方法：用30%的硝酸浸泡半个小时，在用超纯水冲洗干净。如果液体自由滴下，溶剂过滤头正常，在检查；
　　（2）.打开Purge阀，使流动相不经过柱子，如果压力没有明显下降，则是过滤白头堵塞。处理方法：将过滤白头取出，用10%的异丙醇超声半个小时。如果压力降至100PSI以下，过滤白头正常，在检查；
　　（3）.把色谱柱出口端取下，如果压力不下降，则是柱子堵塞。处理方法：如果是缓冲盐堵塞，则用95%的水冲至压力正常。如果是一些强保留的物质导致堵塞，则要用比现在流动相更强的流动相冲至压力正常。假如按上面的方法长时间冲洗压力都不下降，则可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上，用流动相冲洗柱子。这时，如果柱压仍不下降，只有换柱子入口筛板，但一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，所以尽量少用。

标签: 高效液相色谱仪

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高效液相色谱仪使用注意事项

　　液相色谱仪在高效使用中需注意以下几个问题：

　　1、色谱柱中的流动相是否会会排干的问题：

　　不少做色谱分离试验的人遇到过这样的情形：不慎未及时补充流动相，泵将溶剂瓶中的流动相吸干了，HPLC系统由此而停止工作了。如此情况是否会损坏色谱柱?泵是否已将色谱柱中所有流动相都排干了?色谱柱还能使用吗?事实上，如果泵将溶剂瓶中的流动相吸干，并不会造成色谱柱的损坏。即使泵中充满了空气，泵也不会将空气排入色谱柱。因为泵只能输送液体，而不能输送空气。

　　2、色谱柱变干的问题：

　　另一个更可能发生的情况是忘记盖上色谱柱两端的密封盖或盖子太松而使色谱柱变干。同样，整个色谱柱干涸的情况不太容易发生，多半可能只是色谱柱两端的几个毫米变干了，因挥发掉所有溶剂是色谱柱变干需要相当长的时间。即使色谱柱真的变干了，也不一定就不可救药了。可以尝试用一种完全脱气的、表面张力低的溶剂(如经氦气脱气的甲醇)冲洗色谱柱以除去气体。较低的表面张力有助于浸润填料表面;已脱气的溶剂应该能够溶解并去除滞留在填料中的气体。色谱柱大约需要(以1mL/min的流速)冲一个小时或更多的时间被彻底浸润，恢复到正常状态。

　　3、使用PEEK(polyetheretherketone)管路和接头需要注意以下问题：

　　如果经常需要改变流路或更换不同品牌的色谱柱，使用PEEK材料制成的管路和接头会非常方便。PEEK管路容易连接;PEEK接头不仅无需工具，手拧即可固定，而且容易调节锥箍之外的管路长度，方便与不同品牌或规格的色谱柱相连接。

　　使用此类材料的管路需要注意的是：PEEK对卤代烷烃和四氢呋喃的兼容性不好。虽然未观察到上述溶剂溶解PEEK材料的明显迹象，但PEEK遇到上述溶剂会变脆。另一个西药考虑的因素是压力限。不锈钢管可耐受6000psi的压力，但PEEK管只能耐受近4000psi(但多数HPLC应用系统压力不会超过3000psi)。

　　使用PEEK接头时则无需担心接头耐溶剂性能，因为接头几乎或很少与溶剂直接接触。但手拧固定的PEEK接头压力限低于不锈钢管，因而压力太高时，可能会使接头在管路上滑动而产生死体积或漏液。

　　4、预防液相泵的故障：

　　处于良好操作状态的泵，应该能使色谱图上的基线平稳;保留时间的重复性好。在等度洗脱时压力波动小于2%。梯度洗脱时压力变化应是缓慢和平稳的。要保持泵的良好操作性能,必须维护系统的清洁,保证溶剂和试剂的质量,对流动相进行过滤和脱气.下面列出预防泵故障的几项措施：

　　1)用高质量试剂和HPLC级溶剂;

　　2)过滤流动相和溶剂;

　　3)脱气;

　　4)每天开始使用时放空排气，工作结束后从泵中洗去缓冲液;

　　5)不让水或腐蚀性溶剂滞留泵中;

　　6)定期更换垫圈;

　　7)需要时加润滑油;

　　8)查阅有关泵操作手册中的其它建议。

　　9)为了使故障发生后尽快排除，平时应常备密封、单向阀(入口与出口)、泵头装置、各式接头、保险丝等部件，以及更换工具。