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液相色谱仪维护保养(上)及选购指南

时间:2020-05-10    来源:仪多多仪器网    作者:仪多多商城     
  【中国仪器网 维护保养】液相色谱法作为一种新型分析、分离技术,拥有高分析效率、高灵敏度的特点,在食品检测、生物制药、化妆品检测等领域得到了广泛应用。同其他检测方法相比,液相色谱法检测范围广、技术易于推广,且在检测技术上不断推陈出新,已成为国际分析化学界发展zui快的学科之一。
 
  随着液相色谱技术的不断进步,各大仪器厂商也纷纷推出新款液相色谱仪。这些产品具备更先进技术、更高灵敏度、更快分类效率、更短分析时间,并逐步朝着智能化、自动化的方向前进,在检测领域拥有着广阔前景。随着产品在市场的投放,这些新款液相色谱仪也随之成为各检测机构仪器采购名单的常客。下面让我们一起来看看这些液相色谱仪应当如何维护保养吧。
 
  液相色谱泵的使用和维护注意事项 :
 
  1 防止任何固体微粒进入泵体,因为尘埃或其它任何杂质微粒都会磨损柱塞、密封环、缸体和单向阀,因此应预先除去流动相中的任何固体微粒。流动相在玻璃容器内蒸馏,而常用的方法是滤过,可采用Millipore滤膜(0.2µm或0.45µm)等滤器。泵的入口都应连接砂滤棒(或片)。输液泵的滤器应经常清洗或更换。
 
  2 泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相被用完,否则空泵运转也会磨损柱塞、缸体或密封环,zui终产生漏液。
 
  3 输液泵的工作压力决不要超过规定的zui高压力,否则会使高压密封环变形,产生漏液。
 
  流动相:
 
  1 纯度 流动相必须用HPLC级的试剂,使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。溶剂所含杂质在柱上积累,会影响色谱柱的使用寿命。
 
  2 溶解度 样品的溶解度要适宜如果溶解度,如果溶解度欠佳样品会在柱头沉淀,不但影响纯化分离,还会缩短柱子的使用寿命。
 
  3 粘度要低(应<2cp) 高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质,降低柱效,还会使柱压降增加,使分离时间延长。选择沸点在100℃以下的流动相。
 
  4 样品易于回收。应选用挥发性溶剂。

高效液相色谱仪的特点

    高效液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、。分离系统、检测系统和数据处理系统,下面将分别叙述其各自的组成与特点。


    1.进样系统一般采用隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作,进样量是恒定的。这对提高分析样品的重复性是有益的。


    2.输液系统该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。


    高压泵的一般压强为l。47~4。4X107Pa,流速可调且稳定,当高压流动相通过层析柱时,可降低样品在柱中的扩散效应,可加快其在柱中的移动速度,这对提高分辨率、回收样品、保持样品的生物活性等都是有利的。


    流动相贮存错和梯度仪,可使流动相随固定相和样品的性质而改变,包括改变洗脱液的极性、离子强度、PH值,或改用竞争性抑制剂或变性剂等。


    这就可使各种物质(即使仅有一个基团的差别或是同分异构体)都能获得有效分离。


    3.分离系统该系统包括色谱柱、连接管和恒温器等。色谱柱一般长度为10~50cm(需要两根连用时,可在二者之间加一连接管),内径为2~5mm,由"优质不锈钢或厚壁玻璃管或钛合金等材料制成,住内装有直径为5~10μm粒度的固定相(由基质和固定液构成)。


    固定相中的基质是由机械强度高的树脂或硅胶构成,它们都有惰性(如硅胶表面的硅酸基因基本已除去)、多孔性(孔径可达1000?)和比表面积大的特点,加之其表面经过机械涂渍(与气相色谱中固定相的制备一样),或者用化学法偶联各种基因(如磷酸基、季胺基、羟甲基、苯基、氨基或各种长度碳链的烷基等)或配体的有机化合物。


    因此,这类固定相对结构不同的物质有良好的选择性。


    例如,在多孔性硅胶表面偶联豌豆凝集素(PSA)后,就可以把成纤维细胞中的一种糖蛋白分离出来。

 

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    另外,固定相基质粒小,柱床极易达到均匀、致密状态,极易降低涡流扩散效应。基质粒度小,微孔浅,样品在微孔区内传质短。这些对缩小谱带宽度、提高分辨率是有益的。


    根据柱效理论分析,基质粒度小,塔板理论数N就越大。这也进一步证明基质粒度小,会提高分辨率的道理。


    再者,高效液相色谱的恒温器可使温度从室温调到60C,通过改善传质速度,缩短分析时间,就可增加层析柱的效率。

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高效液相色谱仪色谱柱性能的评价

  高效液相色谱仪色谱柱性能的评价包括评价内容和评价方法等方面。

  一、评价内容:

  1、分离效能。

  2、对指定溶质的选择性。

  3、在不同PH值介质中的稳定性。

  4、不同批次但同型号填料间性能的重现性。

  5、适宜的操作压力等。

  二、评价方法:

  以指定的一组标准溶质为样品,测定其在色谱柱上的理论塔板数,作为柱效的衡量指标。

  例:对于反相色谱填料,可以选择一组具有不同极性的芳香族化合物,如苯、萘、菲、苯、甲苯和二甲苯等作为基本组分,再加以苯酚和苯胺等酸、碱性溶质。


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