液相色谱柱是一种用于液体色谱分析仪器。
液相色谱柱的日常维护：
1、每次开机时，流速和柱压要逐渐增加，突然迅速增加，会使柱床受到冲击，引起紊乱，产生空隙
2、在进样前使色谱系统充分平衡，是否平衡可由基线加以判断
3、在进样前，检查色谱系统的各个接头，通常由此能发现是否有漏液现象。如有漏液，空气会从漏缝进入系统引起基线漂移，影响峰高和峰面积的重复性
4、不要把柱接头上得太紧，否则易损坏接头螺纹，引起渗漏
5、不要把柱子放在有气流的地方或直接放到阳光下，气流和阳光都会使柱子产生温度梯度造成基线漂移；如果怀疑基线漂移是由温度梯度引起的，可以设法使柱子恒温
6、若仪器用做常规分析，样品种类有限，但分析次数很多，则不妨为每一类常规分析配置一根专用柱，这样有助于延长柱寿命
7、如果怀疑样品会污染色谱柱，可以用合适的溶剂几百毫升、慢慢冲洗柱子过夜，第二天早晨再用流动相重新平衡柱子约3min、
8、在因装卸、更换、贮存等而挪动柱子时，动作要轻，不要使其受到碰撞，以免柱床因震动产生空隙或通道
9、柱要加标签，新旧分开，不要放在温度变化很大的地方
10、液相色谱柱柱子不用或贮藏时，应封闭并贮存在惰性溶剂中
反相高效液相色谱柱是基于溶质、极性流动相和非极性固定相表面间的疏水效应建立的一种色谱模式，任何一种有机分子的结构中都有非极性的疏水部分，这部分越大，一般保留值越高。
在高效液相色谱中这是应用面较广的一种分离模式，在生物大分子的反相液相色谱条件下，流动相多采用酸性的、低离子强度的水溶液，并加一定比例的能与水互溶的异丙醇、乙腈或甲醇等有机改性剂，大量使用的填料为孔径在30纳米以上的硅胶烷基键合相，除此之外，也有少量高聚物微球。
反相高效液相色谱柱的使用和维护
在色谱操作过程中，需要注意下列问题，以维护色谱柱。
(1)柱子在装卸、更换时，动作要轻，接头拧紧要适度。必须防止较强的机械振动，以免柱床产生空隙。
(2)如果仪器用来做常规分析，样品种类有限，但分析次数多，则不妨为每一类常规分析配置一根专用柱，这样有助于延长柱子的寿命。
(3)避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。
温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况；柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调节流速时应该缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓。
(4)应逐
渐改变溶剂的组成，特别是反相色谱中，不应直接从有机溶剂改变为全部是水，反之亦然。
(5)如使用柱温控制装置时，应注意在通人流动相后才能升温。
(6)一般说来反相高效液相色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效。
(7)选择使用适宜的流动相，以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前面连接一个预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”，避免分析柱中的硅胶基质被溶解。
(8)避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注人柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一个保护柱。保护柱一般是填有相似固定相的短柱。保护柱可以而且应该经常更换。
(9)经常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质。在进行清洗时，对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡，每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右，即常规分析需要50-75mL。
(10)保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇，柱接头要拧紧，防止溶剂挥发干燥。绝对禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。
(11)反相高效液相色谱柱使用过程中，如果压力升高，一种可能是烧结滤片被堵塞，这时应更换滤片或将其取出进行清洗；另一种可能是大分子进人柱内，使柱头被污染；如果柱效降低或色谱峰变形，则可能柱头出现塌陷，死体积增大。
(12)在完成分离分析工作之后，不应立即停机，需及时对色谱分析系统进行冲洗，一般0.5h以上，以除去色谱柱内的杂质。
在日常分离分析工作中，反相高效液相色谱柱的正确使用和维护十分重要，色谱柱使用是否得当，直接影响色谱柱的寿命，稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。
1、一般定性
用已知物和直接对照法定性，这是一种相对可靠的方法，主要可以分为以下四种：
1）保留时间和保留体积
2）相对保留值
3）已知物增加峰高法
4）双柱货双体系
实验表明，各类同系物在两根不同柱上的Vg值有如下关系：
式中：VgI表示在柱I上的比保留体积；VGII表示在柱II上的比保留体积；A1与C1为常数。
从上式可以看出，同系物在两个性质不同的色谱柱上，比保留体积Vg的对数有线性关系，下图就是根据某些化合物和领苯二甲酸二异葵酯柱上的比保留体积的对数制作出的。
经过领苯二甲酸二异葵酯柱分离后，在lgvgII为1.8的位置上有一个未知峰，由图可看出有两种可能性，即酮与伯醇；此时，将样品在柱上I上进行分离，得到lgVgII为1.62的色谱峰，从而可确定该峰是酮而不是醇。
在液相色谱中，可用双体系定性，通过改变流动相和固定相，从而改善分离的选择性，通常改用与原色谱体系有较大差别的其他色谱体系来实现分离。
2、保留值分随份子结构或性质变化的规律
1）GC中的碳数规律：同系物间，在一定温度下，保留值变化遵循如下规律：
2）GC中的沸点规律：同族具有相同碳原子数目的同分异构体间存在如下关系：
3)LC中的保留值规则：对于份子中存在不同数目的重复官能团的化合物，有如下的经验公式：
3、反向液谱的定性
在气谱中广泛使用的Kovats指数定性，在夜谱中，由于组分的保留行为不仅与固定相有关，还与流动相的种类及浓度有关，所以不能直接用同系物间，在一定温度下，保留值变化遵循如下规律指数定性。
4、计算机检索
计算机不仅都能贮存大量保留指数，而且还可以将库中标准数据转换为用户色谱条件下保留指数和tR值，靠检索功能定性。
5、色谱中的辅助技术
液相色谱，对于未知物结构的确定，也常常使用一些辅助技术，常用的有质谱，红外，核磁等。
使用非在线联用技术时，首先将色谱分离后的纯样品收集。
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