超微量紫外可见分光光度计操作简单、准确度高、重现性好。波长长的光线能量小,波长短的光线能量大。分光光度测量是关于物质分子对不同波长和特定波长处的辐射吸收程度的测量。物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了人射光中的某些特定波长的光能量,相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。
超微量紫外分光光度计的使用方法
1、打开仪器电源开关,开启比色皿暗箱盖,调节“0”电位器旋纽,使电表指针处于透光率(T)“0”位,预热约20分钟。
2、调节波长(λ)调节旋纽,选择需用的单色光波长。
3、调节灵敏度开关,选择适当的灵敏度。再用调“0”旋纽复校电表透光率“0”位。
4、将比色皿暗箱盖合上,将参比溶液(空白)推入光路,顺时针旋转“100%”电位器调节旋纽使电表指针处于透光率“100%”处。
5、按上述方式连续几次调整透光率“0”及“100”,直至不变,即可进行测定工作。
6、将校准溶液和待测溶液推入光路,读取校准溶液吸光度(A)值。
7、将待测溶液推入光路,读取待测溶液吸光度值。
8、根据校准溶液和待测溶液吸光度值及校准溶液浓度计算待测物浓度。
超微量紫外分光光度计主要适于DNA、RNA、蛋白样品无稀释的快速检测,在物理学、化学、生物学、医学、材料学、环境科学等科学研究领域获得了日益广泛的应用。
日常维护和保养
①光源。光源的寿命有限,为了延长光源使用寿命,在不使用仪器时不要开光源灯,应尽量减少开关次数。在短时问的工作间隔内可以不关灯。刚关闭的光源灯不能立即重新开启。仪器连续使用时间不应超过3h。若需长时间使用,可以间歇30min。如果光源灯亮度明显减弱或不稳定,应及时更换新灯。更换后要调节好灯丝位置,不要用手直接接触窗口或灯泡,避免油污沾附。若不小心接触过,要用无水乙醇擦拭。
②单色器。单色器是仪器的核心部分,装在密封盒内,不能拆开。选择波长应平衡地转动,不可用力过猛。为防止色散元件受潮生霉,必须定期更换单色器盒干燥剂(硅胶)。若发现干燥剂变色,应立即更换。
③吸收池。必须正确使用吸收池,应特别注意保护吸收池的两个光学面。
④检测器。光电转换元件不能长时间曝光,且应避免强光照射或受潮积尘。
⑤当仪器停止工作时,必须切断电源。
⑥为了避免仪器积灰和沾污,在停止工作时,应盖上防尘罩。
⑦仪器若暂时不用要定期通电,每次不少于20~30min,以保持整机呈干燥状态,并且维持电子元器件的性能。
超微量分光光度计属于高灵敏度分析仪器,虽然操作简单,但我们还是要注意一些细节方面的影响,不然会影响到实验结果的精准度。关于超微量分光光度计的使用和维护就给大家介绍到这里了,更多资讯请继续关注捷配仪器仪表网。
荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器。其能提供包括激发光谱、发射光谱以及荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等许多物理参数,从各个角度反映了分子的成键和结构情况。
荧光分光光度计的基本原理:
由高压汞灯或氙灯发出的紫外光和蓝紫光经滤光片照射到样品池中,激发样品中的荧光物质发出荧光,荧光经过滤过和反射后,被光电倍增管所接受,然后以图或数字的形式显示出来。 物质荧光的产生是由在通常状况下处于基态的物质分子 吸收激发光后变为激发态, 这些处于激发态的分子是不稳定的,在返回基态的过程中将一部分的能量又以光的形式放出,从而产生荧光。
不同物质由于分子 结构的不同,其激发态能级的分布具有各自不同的特征,这种特征反映在荧光上表现为各种物质都有其特征荧光激发和发射光谱;,因此可以用荧光激发和发射光谱的不同来定性地进行物质的鉴定。
荧光分光光度计的优缺点:
优点:灵敏度高,可以用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱,不但可以做一般的定量分析, 而且还可以推断分子在各种环境下的构象变化, 从而阐明分子结构与功能之间的关系。
缺点:
1、荧光的光强并不高,所以呈线性情况有时不很理想;
2、某些反应荧光持续的时间较短;
3、荧光的发散方向不集中,不像透射光那样集中,强度高;
4、受某些离子的干扰影响,荧光会湮灭,试验速度必须要快。
有一些人把原子荧光光度计与X射线荧光光谱仪误认为是同一种仪器,其实它们是有区别的。首先我们分别了解下它们的定义。
1、原子荧光光度计是利用硼氢化钾或硼氢化钠作为还原剂,将样品溶液中的待分析元素还原为挥发性共价气态氢化物(或原子蒸汽),然后借助载气将其导入原子化器,在氩—氢火焰中原子化而形成基态原子。基态原子吸收光源的能量而变成激发态,激发态原子在去活化过程中将吸收的能量以荧光的形式释放出来,此荧光信号的强弱与样品中待测元素的含量成线性关系,因此通过测量荧光强度就可以确定样品中被测元素的含量。
2、X射线荧光光谱仪用X射线照射试样时,试样可以被激发出各种波长的荧光X射线,需要把混合的X射线按波长(或能量)分开,分别测量不同波长(或能量)的X射线的强度,以进行定性和定量分析,为此使用的仪器叫X射线荧光光谱仪。由于X光具有一定波长,同时又有一定能量,因此,X射线荧光光谱仪有两种基本类型:波长色散型和能量色散型。
尽管二者都是把物质激发后检测其荧光,但二者的区别很大,从大的方面看主要有两点:
1、激发光源不同。
原子荧光用的光源很多,如各种激光等,但很少见有用X-射线的;而X-射线荧光则是用X-射线作激发光源。
2、用途不同。
原荧主要用来作定量分析,尤其是金属元素的定量分析;而X荧主要用来作定性分析和结构分析。当然二者的仪器构造、使用方法、检测范围、样品制备等等都不一样。