紫外可见分光光度计对于我们来说熟悉却也比较难读懂理解的。
天天有人提起他的名字却没多少人知道他的工作原理。
下面我们来浅谈一下。
光谱工作原理：
分子的紫外可见吸收光谱是由于分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后，发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。
由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同；
因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线；
可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。
分光光度分析就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。
它是带状光谱，反映了分子中某些基团的信息。可以用标准光图谱再结合其它手段进行定性分析。
根据Lambert-Beer定律说明光的吸收与吸收层厚度成正比，比耳定律说明光的吸收与溶液浓度成正比；
如果同时考虑吸收层厚度和溶液浓度对光吸收率的影响，即得朗伯-比耳定律。
即A=εbc，(A为吸光度，ε为摩尔吸光系数，b为液池厚度，c为溶液浓度)就可以对溶液进行定量分析。
将分析样品和标准样品以相同浓度配制在同一溶剂中，在同一条件下分别测定紫外可见吸收光谱。
若两者是同一物质，则两者的光谱图应完全一致。
如果没有标样，也可以和现成的标准谱图对照进行比较。
这种方法要求仪器准确，精密度高，且测定条件要相同。
实验证明，不同的极性溶剂产生氢键的强度也不同;
这可以利用紫外光谱来判断化合物在不同溶剂中氢键强度，以确定选择哪一种溶剂。
紫外可见分光光度计的工作环境：
1）分光光度计安放在干燥的房间内，使用温度为5-35℃，相对湿度不超过85%
2）仪器应放置在坚固平稳的工作台上，且避免强烈的震动或持续的震动
3）室内照明不宜太强，且应避免直射日光的照射
4）电扇不宜直接向仪器吹风，以防止光源灯因发光不稳定而影响仪器的正常使用
5）尽量远离高强度的磁场、电场及发生高频波的电气设备
6）避免在有硫化氢等腐蚀性气体的场所使用
紫外可见分光光度计使用中应注意：
1、使用的吸收池必须洁净，并注意配对使用。量瓶、移液吸管均应校正、洗净后使用。
2、取吸收池时，手指应拿毛玻璃面的两侧，装盛样品以池体的4/5为度，使用挥发性溶液时应加盖，透光面要用擦镜纸由上而下擦拭干净，检视应无溶剂残留。吸收池放入样品室时应注意方向相同。用后用溶剂或水冲洗干净，晾干防尘保存。
3、供试品溶液浓度除各该品种已有注明外，其吸收度以在0.3～0.7之间为宜。
4、测定时除另有规定外，应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照，采用1cm石英吸收池，在规定的吸收峰±2nm以内，测几个点的吸收度或由仪器在规定的波长附近自动扫描测定，以核对供试品的吸收峰位置是否正确，并以吸收度最大的波长作为测定波长，除另有规定外吸收度最大波长应在该品种项下规定的测定波长±2nm以内。
5、供试品应取2份，如为对照品比较法，对照品一般也应取2份。平行操作，每份结果对平均值的偏差应在±0.5%以内。
6、选用仪器的狭缝宽度应小于供试品吸收带的半宽度，否则测得的吸收度值会偏低，狭缝宽度的选择应以减少狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准，对于大部分被测品种，可以使用2nm缝宽。
原子吸收光谱仪是试验中常见的仪器，因此实验室人员应该好好的去维护它，以免发生不必要的故障，造成实验结果的不准确
故障排除首先应分析原因。仪器故障产生的原因和出现的现象是错综复杂的。必须小心观察故障现象，认真检测和细致的分析比较，才能找到故障的所在。下面介绍几种常见故障的排除方法
1、光源系统故障
A、空心阴极灯点不亮故障原因：灯电源出问题或未接通；灯头与灯座接触不良；灯头接线断路；灯漏气。
查处方法：分别检查电源、连线和插接件；若不是电路问题，再进行换灯检查。
B、灯阴极辉光颜色异常故障原因：灯内惰性气体不纯。
查处方法：在工作电流或大电流(80Ma,150mA)下反向通电处理。
C、灯阴极口外发光或阴极内发生跳动的火花状放电故障原因：灯内惰性气体压力降低不能维持正常放电，后者由阴极表面氧化物或杂质所致。
查处方法：前中情况需换新灯；后种情况通过十几毫安的电流直到火花放电停止，若无效则换新灯。
2、能量输出方面的故障
A、空心阴极灯亮而高压开启后无能量输出故障原因：无负高压；空心阴极灯发光异常或位置不对；波长不准；燃烧器挡光；单色器故障；主机电路故障。
查处方法：第二、三、四种情况易查，第一、五、六种情况需按说明书或维修手册的规定逐一处理或联系厂家。
B、输出能量过低故障原因：灯能量弱；光路调整不佳；透镜或单色器内光学元件被污染；波长不准；放大电路增益下降；光电倍增管衰老。
查处方法：如果是全波段内能量普遍偏低，应检测光电倍增管是否衰老和负高压是否正常；如果能量低与波长有关，除查看光学元件有无污染外，还应检查单色器光学系统有无机械位置变化；如果是因波长示值错乱，应重新校正波长；如果是线路增益问题，需检查放大板和光电倍增管查处原因。或直接联系厂家。
C、工作时能量显示不变化故障原因：主机电路中前置放大器连接问题；主放大器异常。
查处方法：检查前置放大器和运算放大器。
D、挡光时能量不为零故障原因：前置放大器组件或主放大器组件失调或损坏。
查处方法：用万用表监测前置放大器输出，或更换主放大器上的运算放大器。
3、吸收信号方面的故障
A、零点不对故障原因：空心阴极灯衰老，强度太弱；波长调节不准；石英窗口和聚光镜表面污染。
查处方法：针对具体原因相应处理
B、静态基线漂移故障原因：光源系统和检测系统故障。
查处方法：首先查明仪器是否受潮，放置吸潮硅胶仪器通电去潮，一段时间后仪器稳定性会逐渐正常。查明仪器单独“地线”是否良好。任何电磁感应都会使仪器产生漂移。元素灯和灯电源的稳定性负高压电源的稳定性等都可能导致基线漂移。
C、点火基线漂移故障原因：静态基线漂移；原子化系统故障。
查处方法：排除静态基线漂移；检查吸液毛细管有无堵塞和气泡，废液排泄是否畅通和雾化室内有无积水。气源压力不稳和燃烧器预热不够均会引起漂移。当然波长不准也会导致漂移。针对具体情况分别加以处理。
D、噪声大、读数不稳故障原因：光源系统、原子化系统、分光系统和检测系统发生故障。
查处方法：首先区分故障是来源于原子化系统还是电检测系统。通过点燃火焰吸喷纯水和不点火的情况比较，据基线稳定度就和判断。
如果判断故障来源于原子化系统，还要进而判断是来自火焰还是喷雾装罩，可通过吸喷纯水和调节喷雾器伟观察噪声电平是否明显减小或消失判断，否则噪声可能主要来自火焰。可调整燃助比、燃烧器高度和稳定气源压力来观察噪声电平的变化情况。喷雾器是火焰原子化系统噪声的主要来源。
如果判断故障主要来自电检测系统，需先区分出来自灯电源还是检测系统。可使用合格的铜灯让仪器和灯充分预热，切断入射光，考察此时的噪声电平。若正常则故障来自灯电源或元素灯。再进一步检测灯电源或更换新灯检查。
如果否定来自灯或灯电源，则需进一步检查单色器系统和检测系统。故障现象随波长而变化，则可判断故障主要来自单色器系统。单色器内部的杂散光、光栅及其他光学元件表面积聚灰尘、污秽均能使噪声电平增大。检测系统是噪声主要来源之一。需用万用表和示波器先查清是来自电源供电还是光电倍增管或电路。读数不稳定表示吸收信号上叠加较大的噪声。这对测量是不利的。导致读数不稳定的原因主要来自原子化系统，吸液毛细管堵塞，雾化器雾口腐蚀，雾化室内积液，空气和乙炔不纯或压力不稳，试液基体浓度过大，有沉淀和夹杂物，燃烧器缝口沉积有碳和无机盐或缝口堵塞而使火焰呈锯齿形，所有这些情况均影响读数稳定性。应针对具体问题加以检查排除。
4、灵敏度和检出限方面的故障
A、灵敏度低的故障原因：仪器工作条件不是较佳；毛细管和节流嘴相对位置和同心度不佳；撞击球位置不佳；雾化室内积废液；元素灯质劣；线路增益下降；光学元件积灰尘。
查处方法：需逐一根据不同问题查处处理。
B、检出限偏离故障原因：导致灵敏度低的诸项故障；造成噪声过大和读数不稳的各项故障。
查处方法：根据上述有关方法查处故障。
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