X
你好,欢迎来到仪多多。请登录 免费注册
仪器交易网
0我的购物车 >
购物车中还没有商品,赶紧选购吧!

制备型液相色谱仪应如何选择操作条件 液相色谱操作规程

时间:2020-05-16    来源:仪多多仪器网    作者:仪多多商城     
  【仪器网 使用手册】制备型液相色谱仪目的是对产品的单体进行提取和纯化,与蒸馏、萃取等纯化方法相比制备型液相色谱法更有效,但对操作的要求也更高。为保证制备型液相色谱仪可以达到理想的实验效果,需要谨慎选择操作条件,减少影响分离效果的因素。
 
  色谱柱的选择
 
  色谱柱的容量有一定限制,每种色谱柱都有自己的负载能力,因此样品的导入值上限需要根据所用的色谱柱确定。色谱柱与大样品量的关系如下:
 
  1.色谱柱内半径越大,柱子的负载能力越高。
 
  2.分配系数K增加,柱子的负载能力也会增加。同时,溶质的保留体积同样也会增加。
 
  3.色谱柱的填充方法影响着填充密度,用良好方法填充的柱子密度趋近它的大值,柱子的样品量和分辨率同样也会趋近大值。
 
  4.采用表面积大的吸附剂虽然会减弱色谱系统的速度和适用范围,但可以增加柱子的负载能力。
 
  5.柱子的负载能力还随着柱子的长度增加而增长,但柱子过长会损失柱效。
 
  6.填料颗粒的大小与柱子负载量也呈正相关关系。
 
  样品的溶解
 
  样品在溶剂里的溶解度会影响注入的大样品量。在流动相里难溶解的物质通常不能充分分离或分辨率比较低,因此需要先将样品溶解在另一种溶剂中,再将这种溶液送人色谱分离系统。中间溶剂的选择很重要,并且需要经验。
 
  流动相的纯度
 
  流动相的纯度与样品中的纯度息息相关。在分离组分特性相近或痕量组分时,流动相里的杂质还可能污染色谱柱,影响分离效能。因此流动相须保证纯净。
 
  流动相的流速
 
  流动相的流速与分离速度、分离效率相关,流速越快分离速度越快,但分离效率越低,因此需要选择合适的速度保证速度与效率并重。
 
  固定相的选择
 
  为了分辨效果,应尽量选择吸附色谱。从填料的容量看,全多孔型比表面多空型好;从固定相微粒的大小看,30~50μ较常用。

液相色谱仪5种常见故障及处理方法

  液相色谱仪是一种常用的分析仪器,主要由高压输液泵、进样系统、温度控制系统、色谱柱、检测器、信号记录系统等部分组成,被广泛用于生物医学、环境化学、石油化工等领域中。

  1、柱压高原因

  (1)缓冲液盐分如(乙酸铵等)沉积于柱内;

  (2)样品污染沉积。处理对于第一种情况先用40~50℃的纯水,低速正向冲洗柱子,待柱压逐渐下降后,相应提高流速冲洗,柱压大幅度下降后,用常温纯水冲洗,之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟;对于第二种情况,由样品的沉积引起污染的C18柱,和纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定),再用换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。

  2、气泡溢出

  流动相内有气泡,关闭泵,打开泄压阀,打开purg键,清洗脱气,气泡不断从过滤器冒出,进入流动相,无论打开purge键几次,都无法清除不断产生的气泡。原因过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内,过滤器内部由于霉菌的生长繁殖,形成菌团,阻塞了过滤器,缓冲液难以流畅地通过过滤器,空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动相。处理过滤器浸泡于5%硝酸溶液中,超声清洗几分钟即可;亦可将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中12~36小时,轻轻震荡几次,再将过滤器用纯水清洗几次,打开泄压阀,打开purge键清洗脱气,如仍有气泡不断从过滤器冒出,继续将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中,如没有气泡不断从过滤器中冒出,说明过滤器内部的霉菌菌团已被硝酸破坏,流动相可以流畅地通过过滤器。打开泄压阀,打开泵,流速调至1.0~3.0ml/min,纯水冲洗过滤器1小时左右。即可将过滤器清洗干净。关闭泄压阀,纯甲醇冲洗半小时即可。

  3、既无压力指示,又无液体流过

  (1)泵密封垫圈磨损;

  (2)大量气泡进入泵体。处理对于第一种情况,更换密封垫圈;对于第二种情况,在泵作用的同时,用一个50ml的玻璃针筒在泵的出口处帮助抽出空气。

  4、压力波动大,流量不稳定

  原因系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物,使得两者不能密封。处理工作中注意观察流动相的量,保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底,避免吸入空气,流动相要充分脱气。如为单向阀和阀座之间夹有异物,拆下单向阀,放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗。

  5、出峰不佳,峰分叉

  (1)色谱柱被污染;

  (2)柱头填料塌陷。处理对于第一种情况,先用纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定),再换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。如冲洗后依然出峰不佳,则考虑第二种情况。对于第二种情况,拧开柱头,检查柱填料是否硬结或塌陷。去除硬结部分(污染的填料),装入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用与柱内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧,再填平,滴甲醇,再压紧反复几次,直至装满填平。柱头用甲醇冲洗干净,擦净柱外壁的填料,拧紧柱头,用纯甲醇冲洗30分钟以上。

标签: 液相色谱仪
液相色谱仪 液相色谱仪5种常见故障及处理方法_液相色谱仪

高效液相色谱仪峰面积差别很大的解决方法

  高效液相色谱仪分析中进样基线很好,保留时间能锁定,压力也稳定,但是峰面积差别很大,大概有2倍的差别,这种情况出现的原因可能是多方面的,建议采用以下方法解决:

  1、调换一根新色谱柱,如果情况一样,则排除柱子的原因。

  2、将在线过滤器拆下,用超声波清洗,如果结果一样,说明与在线过滤器无关。

  3、考虑是不是进样阀有问题或者定量环堵。建议多进几针样品,看是否有规律,如果没有规律,应检查一下进样器的其他部位,如果是进样器系统出现问题,应尽快解决之。

  4、对进样器清洗一下,清洗干净后先进一针空白,再进样,看看结果如何,如果有明显减少,那可能是进样器污染,有样品残留在进样阀体内,在切换的过程中被流动相带入色谱柱。

  5、考虑样品溶液是否均匀。建议同一个浓度连续进样5次,看一下结果如何变化,有没有规律;如果是样品溶液不均匀,可以再搅拌一下。

  6、考虑光源是不是正常。

  7、考虑浓度是否在线性范围内。有时候定量时浓度太高或太低都会产生较大的分析误差。

  8、考虑取样方式是否正确,每次取样后是否对针头外面的附着液进行清除。

  9、高效液相色谱仪的计算机软件编制可能存在问题。对比可以适当改变软件。

标签: 高效液相色谱仪
高效液相色谱仪 高效液相色谱仪峰面积差别很大的解决方法_高效液相色谱仪

上一篇:液相色谱仪流动相的选择与优化 ...

下一篇:恒温水浴的操作使用及注意事项

  • 手机多多
  • 官方微信订阅号
商品已成功加入购物车!