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夹芯式电泳槽的使用方法与注意事项 电泳槽操作规程

时间:2020-05-16    来源:仪多多仪器网    作者:仪多多商城     
  【中国仪器网 使用手册】所谓电泳,是指带电粒子在电场中的运动,不同物质由于所带电荷及分子量的不同,因此在电场中运动速度不同,根据这一特征,应用电泳法便可以对不同物质进行定性或定量分析,或将一定混合物进行组份分析或单个组份提取制备,这在临床检验或实验研究中具有极其重要的意义。电泳仪正是基于上述原理设计制造的。下面简单介绍其使用方法及注意事项。
 

  
  一、如何使用电泳槽
 
  夹芯式垂直电泳槽使用方法:
 
  1、组成部件
 
  (1)装有铂金丝的贮液槽一对,配有冷却装置及电泳缓冲液流出口。
 
  (2)凹型橡胶框,配有玻璃板,可分别制作厚度为lmm、1.5mm的凝胶板,操作时根据需要选择适当厚度的玻璃板及梳子配套使用。
 
  (3)样品孔模具(梳子)用于电泳加样。
 
  (4)固定贮液槽的螺丝杆及螺母4对,28D、30型为5对。
 
  (5)橡胶管五根。两根长的用于连接冷却水的出入口;中等长度的两根用于连接电极缓;中液的流出口;zui短的一根用于连接贮液槽间的冷却水。
 
  (6)导线1付。
 
  2、使用方法
 
  (1)清洗部件
 
  上述部件组装前要彻底清洗干净。尤其是玻璃板及凹形带槽橡胶框,必须用泡沫海绵沾少许肥皂粉或洗涤剂彻底清洗干净。清洗后的玻璃板应放在玻璃板支架上晾干水后方能使用。
 
  (2)组装电泳槽
 
  A、将四只固定螺杆插进一只贮液框(半上槽)的相应孔洞中,然后将贮液框仰放在桌上;
 
  左手拿凹型槽橡胶模框,右手的拇指与中指握住玻璃板的两侧边缘插到橡胶模框内 (注意手指不能接触灌胶面的玻璃板);
 
  将带有玻璃的橡胶模框子放在仰放的贮液槽框架上,其下缘必须对齐贮液槽框下缘;
 
  双手拿另一只贮液槽框与仰放在桌上的贮液槽框相合,并使橡胶框上的凸出线位于贮液槽有机玻璃框中央;
 
  装上四只螺母,拧紧螺丝。注意拧紧螺丝时用力应均匀,用双手按斜角位置双双逐渐拧紧;
 
  将电泳槽垂直竖起,放在桌上,带短玻璃板的贮液槽称上槽(阴极端),带长玻璃板的贮液槽称为下槽(阳极端),在长玻璃板与橡胶框间有一缝隙。此缝隙可用已熔化的10%琼脂沿长玻璃板下端灌入,为防止留存气泡,可稍抬起一端即可赶去气泡。待琼脂完全凝固后才能灌胶。
 
  B、也可将槽垂直竖起,将带有玻璃的橡胶模框直接放入槽中,对称拧紧螺丝后,用琼脂封底边。
 
  3、灌胶
 
  (1)先灌分离胶,待凝固后再灌浓缩胶。灌胶前接通冷却水,夹紧连接上下贮液槽的两根橡胶管。
 
  (2)用细头滴管吸取胶液,沿长、短玻璃板中间缝隙从一端加入胶液。为防止产生气泡,可稍拾起另一端(气泡往高处走),不断加入胶液。若单层胶(分离胶)则加胶量约距离短玻璃板上端0.3厘米处,轻轻加少许水,双手轻轻将梳子插入,待胶凝后就可形成凹形加样孔。
 
  (3)为防止漏胶,在上、下贮液槽中立即加入蒸馏水,但蒸馏水不能超过短玻璃板上缘。
 
  (4)胶凝固后即可看到样品槽梳子与凝胶板间有一层折
 
  射率不同的亮区。
 
  4、加样
 
  (1)松开连接上、下贮液槽两根橡皮管上的夹子,放掉槽内的蒸馏水,待水流完后,再夹紧夹子。
 
  (2)双手轻轻取出样品梳子,即可看到界线清楚的加样孔,将孔中水分吸去(注意千万不要碰坏孔沿的字面)。
 
  (3)在上、下贮液槽中加入缓;中液,液体高度应超过上贮液槽短玻璃板上缘。
 
  (40用微量注射器吸取一定量的样品加到长、短玻璃板间的凹型凝胶样品孔内(注意加样动作要轻,针头不能碰坏胶面)。
 
  5、电泳
 
  一贮液槽导线与电泳仪的负极相连,下贮液槽导线与电泳仪的正极相连。检查线路无误,方可按照所要求的电压电流进行电泳。
 
  二、注意事项
 
  1、电泳仪通电进入工作状态后,禁止人体接触电极、电泳物及其它可能带电部分,也不能到电泳槽内取放东西,如需要应先断电,以免触电。同时要求仪器必须有良好接地端,以防漏电。
 
  2、仪器通电后,不要临时增加或拨除输出导线插头,以防短路现象发生,虽然仪器内部附设有保险丝,但短路现象仍有可能导致仪器损坏。
 
  3、由于不同介质支持物的电阻值不同,电泳时所通过的电流量也不同,其泳动速度及泳至终点所需时间也不同,故不同介质支持物的电泳不要同时在同一电泳仪上进行。
 
  4、在总电流不超过仪器额定电流时(zui大电流范围),可以多槽关联使用,但要注意不能超载,否则容易影响仪器寿命。
 
  5、某些特殊情况下需检查仪器电泳输入情况时,允许在稳压状态下空载开机,但在稳流状态下必须先接好负载再开机,否则电压表指针将大幅度跳动,容易造成不必要的人为机器损坏。
 
  6、使用过程中发现异常现象,如较大噪音、放电或异常气味,须立即切断电源,进行检修,以免发生意外事故。

电泳槽的常见问题解决介绍

    电泳槽时凝胶时间不对,那么通常胶在60min,1H内凝;

    如果凝的太慢,可能是TEMEN,APS剂量不够或者失效。

    APS应该现配现用,TEMED不稳定,容易被氧化成黄色。

    如果凝的太快,可能是APS和TEMED用量过多,此时胶太硬易裂,电泳时易烧胶。

    纹理和托尾现:

    由于样品溶解不佳引起的,克服的方法可以在加样前离心,增加一些增溶辅助试剂如尿素。

    蛋白带过宽,与邻近泳道的蛋白带相连时由于加样量太多,可以减少上样量。

    电泳时间比正常要长。

    可能由于凝胶缓冲系统和电极缓冲系统的PH选择错误,即缓冲系统的PH和被分离物质的等电点差别太小,或缓冲系统的离子强度太高。

    指示剂成微笑符号(指示剂前沿呈现向上的曲线形),说明凝胶的不均匀冷却,中间部分冷却不好,导致分子有不同的迁移率所致。

    指示剂成哭脸符号(指示剂前沿呈现向下的曲线形),由于电泳槽的装置不合适,尤其是凝胶和玻璃板组成的“三明治”底部有气泡或靠近隔片的凝胶聚合不完全。

 

 

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电泳槽 电泳槽的常见问题解决介绍_电泳槽

怎样解决电泳槽故障方法

  电泳槽密封条漏液(垂直槽)一般情况下,电泳槽较窄的密封条不易漏夜,反之较宽的则比较容易漏,此时先检查:1、密封条是否老化或损坏,若已经老化或损坏,应更换密封条。2、如果密封条完好无损,目测检查密封条是否有凹凸不平现象,如果有应将密封条拆下进行重新安装。安装时注意不要拉扯密封条,使其自然地嵌入密封槽内,并保证安装均匀,避免密封条出现凹凸现象。3、如果缓冲液是从密封条的中间漏出,则说明漏处比两边凹(不在同一水平线上),我们则需要把密封条拆下,清理干净槽内胶粘剂,然后再将薄厚相当的窄边条(如0.4毫米)粘在槽内,以垫起凹下的密封条,使其与两边保持一致,此后再将密封条粘在槽内即可。

  电泳槽内无电流(铂紧电极上无气泡)1、首先利用万用表检查电泳仪有无输出电压(注意选择直流电压挡,输出不得超过量程,以免损坏万用表)2、利用万用表电阻挡检查电泳输出线是否导通。3、利用万用表电阻挡检查电泳槽电极插座与铂金丝之间是否可靠导通,重点检查输出插座与插头是否与连接铂金丝的焊片紧密连接,如发现松动请使用尖嘴钳将其紧固即可,完毕进行检测若还没有电流则检查铂金丝是否断裂,若铂金丝有断裂迹象则用电烙铁将其焊接,首先将助焊剂涂在铂金丝上再用电烙铁粘上焊锡将断裂的两段铂金丝焊连即可。铝扳散热效果不佳先检测铝板与玻璃板之间有无缝隙,若有缝隙首先应紧固螺栓,如果经坚固螺栓仍无法使铝板与玻璃板帖平,可将铝板拆下清理上面的污垢,根据缝隙的大小用相应厚度的垫片将铝板垫起,并保证铝板的四边平整(垫平后的铝板平面应低于密封条3-4毫米)。

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