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液相色谱仪色谱柱常见故障和解决办法 液相色谱解决方案

时间:2020-05-17    来源:仪多多仪器网    作者:仪多多商城     
  伴随着色谱技术的飞速发展,色谱法不光可以用来分析有色物质,还能够用来分析无色物质了,尤其是在化合物的分析中用的为广泛。目前色谱法被多个领域广泛的应用。其中液相色谱法能够把许多的问题都伴随在图谱上面显示出来。有一些问题故障能够通过调整色谱的参数来解决,还有一些问题需要通过修改我们的操作程序来解决。对于色谱柱和流动相的选择是得到准确的色谱图的关键。下面为大家说说怎么选择。
 
  一,液相色谱仪色谱图出现拖尾峰
 
  1. 筛板阻塞,色谱柱的两头的过滤筛板如果堵塞,样品就会在筛板部分受阻而形成时间延迟,使得样品在柱后流出时峰型形成拖尾。需要通过反冲色谱柱,或者更换筛板。
 
  2. 色谱柱塌陷,是指色谱柱由于其它原因引起了柱效率丧失,不能对物质形成保留,使得物质不在固定相上保留而随流动相流出,但是又还有一点柱效,因此形成拖尾。需要重新填充色谱柱或者更换色谱柱。
 
  3. 有污染,即样品不在同一起跑线起跑,从后面开始跑得到达终点稍晚,表现出拖尾。更换色谱柱或者采用有机溶剂梯度洗脱1h以上,以冲洗柱子。
 
  4. 流动相PH值选择错误,如某PH下有的样品存在分子型和离子型的动态平衡,离子型的陆续向分子型转化就会表现出拖尾。调节PH值可抑制分子解离,改善拖尾,对于碱性化合物,相对较低的PH值更有利于得到对称峰。
 
  二、液相色谱仪出现前沿峰
 
  1. 样品过载,被保留的样品在正常出峰时间前陆续出来,形成前沿峰。降低样品含量。
 
  2. 样品溶剂选择不恰当,当样品溶剂的洗脱能力大大强于流动相时会出现前沿峰,例如,在反相色谱中用已腈做样品溶剂,而流动相的洗脱力较弱时会出现前沿峰。选择流动相或者接近流动相的比例作为样品溶剂。
 
  3. 色谱柱损坏,色谱柱柱效损失,不能对物质形成保留。更换色谱柱。
 
  4. 在大峰前有小峰出现,假象前沿峰,即大峰前包埋了没有分开的小峰。调整流动相洗脱梯度。
 
  三、液相色谱仪基线漂移
 
  1.色谱柱柱温波动,即使是很小的温度变化都会引起基线的波动,通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。使用柱温箱,控制好柱子和流动相的温度,在检测器之前使用热交换器。
 
  2. 流动相不均匀,流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。使用HPLC级的溶剂,流动相在使用前进行脱气处理。
 
  3. 流通池被污染或有气体。用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要,可以用1N的硝酸(不要用盐酸)。
 
  4. 流动相配比不当或流速变化。更改配比或流速,为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。
 
  5. 样品中有强保留的物质,以馒头峰样被洗脱出,从而表现出一个逐步升高的基线。使用保护柱,如有必要,在进样之间或在分析过程中,定期用强溶剂冲洗柱子。
 
  四、色谱图出现宽峰
 
  1.色谱柱污染或失效,造成塔板数降低。更换同样类型的色谱柱,如果新柱子可以提供对称的色谱峰,则用强溶剂冲洗旧柱子。
 
  2. 柱子与检测器之间的管路太长或管路内径太大。更换内径较小的短管路。
 
  3. 检测器对反应时间或池体积响应过大。减少响应时间或使用更小的流通池。
 
  五、色谱仪基线噪音
 
  1. 在流动相、检测器或泵中有空气(尖锐峰)。流动相脱气,冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。
 
  2. 漏液。检查管路接头是否松动,泵是否漏液,是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要,更换泵密封。
 
  3. 流动相混合不完全。用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂。
 
  4. 温度影响(柱温过高,检测器未加热)。使用柱温箱,减少温度差异或加上热交换器。
 
  5. 在同一条线上有其他电子设备(偶然噪声)。断开LC、检测器和记录仪,检查干扰是否来自于外部,加以更正。 采用精密级稳压电源。
 
  六、色谱柱分离度不够
 
  1.流动相梯度洗脱设置不合理。优化梯度洗脱程序。
 
  2.流动相污染或变质(引起保留时间变化)。重新配置流动相。
 
  3. 保护柱或分析柱阻塞。去掉保护柱进行分析,如果必要则更换保护柱;如果分析柱阻塞,可进行反冲;如果问题仍然存在色谱柱可能被强保留的污染物损坏,建议使用恰当的再生程序;如果问题仍然存在,进口可能阻塞了,更换入口处的筛板或更换色谱柱。
 
  就21世纪的色谱发展来看,我国的色谱行业正处于喷井的发展状态。前景的可观,具有很大的发展空间。未来,伴随着国家科研的不断上升,我们国家色色谱仪之类的相关仪器能够取得重大的突破。未来仪器的发展将迎来更好的明天。色谱柱是色谱仪的一个核心。相信未来的色谱柱也会取得很大的突破。

关于液相色谱仪的选择

    液相色谱仪是一种常见的色谱分析方法,与气相色谱相比液相色谱可以在常温中操作,且不受样品挥发度和热稳定性的限制。这使得液相色谱非常适合相对分子量较大,难汽化,不易挥发或对热敏感的物质、离子型化合物和高聚物的分离分析。

 

    然而要选购一台品质优良的液相色谱并不容易。液相色谱仪的指标很多,有关于泵的、关于检测器的、关于色谱柱的……不过,从选购角度考虑,可以优先考虑噪音、漂移、最小检测浓度、定性定量重复性等主要技术指标。当然,这些指标都要放在系统、回路里去看去比较。

    1.噪音

    噪音指由仪器的电器元件、温度波动、电压的线性脉冲以及其他非溶质作用产生的高频噪声和基线的无规则波动产生的声音。噪音的大小直接关系到仪器的检测灵敏度,噪音越大检测的灵敏度就越低。对于检测低含量的样品就要求仪器的噪音越小越好,否则噪音过大将会导致基线不稳,甚至影响分析结果;

    2.最小检测浓度(最小检测限)

    最小检测浓度是反映仪器灵敏度的重要参数。根据公式CL=2×Nd×C/H(CL:最小检测浓度 Nd:噪音 C:样品浓度最小检测浓度 H:样品峰高),最小检测浓度是和噪音成正比的,噪音越大,最小检测浓度就越大,灵敏度就越低。如果选购的仪器回避了这个指标,说明他们不愿在最小检测浓度的基础上去比较噪音;

    3.漂移

    漂移是指仪器稳定后一段时间内基线漂离原点的距离,通常用来衡量仪器稳定快慢。高品质的仪器能在较短的时间内达到稳定,从而在一定程度上提高分析效率;

    4.定性定量重复性

    主要是考核仪器稳定性的指标,这对于分析样品来说是非常重要的。好的仪器其稳定性应该是十分不错的,这就要求多次进样保留时间及含量的一致性,这样做出来的结果才能使人信服。虽然这些指标都属于检测器,但是就像前面所说的,条件是要放在整个回路和系统里去看去比较。

    例如:泵的脉动会直接影响噪音指标、泵的流量准确度指标,以及密封性不好也会影响相关指标。所以要系统地看指标才可以反应出仪器的一些真实水平。

    在选择仪器的时候需要充分考虑到仪器的方方面面才能拿到自己满意的机器。

    首先从常规的几个部件做个简单的分析。

    (一)输液泵应具备如下性能:

    ① RSD(流量稳定性)<0.3%;

    ② 流量范围宽, 0.1~5.0ml/min内连续可调,有的实验则需要更大流量;

    ③ 输出压一般应能达到150~400 kg/cm2,流量越大,最高压力越低;

    ④ 液缸容积小,有助于减少流动相死体积,利于清洗。

    ⑤ 密封性能好,耐腐蚀。

    (二)检测器

    ①紫外检测器,分为可变单波长检测器VWD和二极管阵列检测器DAD,可以检测有紫外吸收的物质

    ②荧光检测器,检测有荧光的物质

    ③视差折光检测器,通用型检测器,但对环境要求极为苛刻,而且灵敏度低

    ④ELSD,蒸发光散射检测器

    ⑤MSD,质谱检测器

    常用的是紫外检测,然后是MSD和ELSD

    (三)色谱柱

    要求柱效高、选择性好,分析速度快等。目前市场上销售的用于HPLC的各种微粒填料如多孔硅胶以及以硅胶为基质的键合相、有机聚合物微球(包括离子交换树脂)、氧化铝、多孔碳等,其粒度一般为3,5,7,10μm等,柱效理论值可达5~16万/米。

    一般的分析只需5000塔板数的柱效;同系物分析500即可;难分离物则可用2万的柱子。

    因此一般10~30cm左右的柱长基本能满足复杂混合物分析的需要。所以要根据自己实际情况来选择合适的柱子。

    柱效受柱内外因素影响,为使色谱柱达到较佳效率,除柱外死体积要小外,还要有合理的柱结构(尽可能减少填充床以外的死体积)及装填技术。即使可以的装填技术,在柱中心部位和沿管壁部位的填充情况总是不一样的,靠近管壁的部位比较疏松,易产生沟流,流速较快,影响冲洗剂的流形,使谱带加宽,这就是管壁效应。这种管壁区大约是从管壁向内算起30倍粒径的厚度。在一般的液相色谱系统中,柱外效应对柱效的影响远远大于管壁效应。

    此外,温度在色谱分析中是个不容忽视的环境条件,环境温度对溶剂的溶解能力、色谱柱的性能、流动相的粘度都有影响。而且不同的检测器对温度的敏感度不一样。保持恒定的温度对实验而言是个绝对不容忽视的条件,因此也要留意注温箱的选择。以保证实验结果的准确性。

    (四)进样器

    进样装置要求:密封性好,重复性好,死体积小,保证中心进样,进样时对色谱系统的压力、流量影响小。而且进样方式多种多样,可分为隔膜进样、停流进样、阀进样、自动进样。自动进样器则是市场发展的趋势。

    (五)数据处理系统

    一般专业的液相色谱仪生产厂家都有自己配套的液相色谱仪控制软件。但有不少液相色谱仪可以使用通用型的色谱数据工作站进行数据计算处理。进口软件价格比较高,这个自己得根据资金选择了。

    二元泵和四元泵的区别二元有两个泵,泵后混合,气体的溶解度随压力的增大而增大,所以二元高压混合不会产生气泡。四元只一个泵(另外一个是辅泵),是泵前混合,在常压下进行的,两种液体混合时,会降低气体在混合溶液中的溶解度,通常会有气泡产生,所以四元低压梯度系统一定要配在线真空脱气机

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高效液相色谱仪的操作过程

  高效液相色谱仪也叫高压液相色谱、高速液相色谱、高分离度液相色谱等,它是在经典液相色谱法的基础上,于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀,小颗粒具有高柱效,但会引起高阻力,需用高压输送流动相,故又称高压液相色谱。又因分析速度快而称为高速液相色谱。

  由于液相色谱分析技术涉及的样品种类繁多、样品组成及其浓度复杂,样品物理形态多变,对液相色谱仪的正常分析测定造成一些干扰因素,如果不注意仪器的维护和保养,会对日常的分析测定带采不便,所以需要对仪器的使用以及维护要做一些了解才能熟练掌握这种分析技术。

  高效液相色谱仪的操作过程:

  1、翻开HPLC工作站(包含计算机软件和色谱仪),衔接好活动相管道,衔接检测体系。

  2、对抽滤后的活动相进行超声脱气10-20分钟。

  3、过滤活动相,根据需求挑选不一样的滤膜。

  4进入HPLC操控界面主菜单,点击manual,进入手动菜单。

  5、有一段时刻没用,或许换了新的活动相,需求先冲刷泵和进样阀。冲刷泵,直接在泵的出水口,用针头抽取。冲刷进样阀,需求在manual菜单下,先点击purge,再点击start,冲刷时速度不要超越10ml/min。

  6、调理流量,初度运用新的活动相,能够先试一下压力,流速越大,压力越大,通常不要超越2000。点击injure,选用适宜的流速,点击on,走基线,调查基线的状况。

  7、规划走样办法。点击file,选择select?users?and?methods,能够选择现有的各种走样办法。若需树立一个新的办法,点击new?method。选择需求的配件,包含进样阀,泵,检测器等,根据需求而不一样。选完后,点击protocol。一个完整的走样办法需求包含:a、进样前的稳流,通常2-5分钟;b、基线归零;c、进样阀的loading-inject变换;d、走样时刻,随不一样的样品而不一样。

  8、进样和进样后操作。选定走样办法,点击start。进样,一切的样品均需过滤。办法走完后,点击postrun,可记载数据和做符号等。悉数样品走完后,再用上面的办法走一段基线,洗掉剩余物。

  9、关机时,先关计算机,再关液相色谱仪。

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高效液相色谱仪 高效液相色谱仪的操作过程_高效液相色谱仪

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