分光光度分析中经常出现波动的问题,吸光度无法稳定在一个恒定的数值上。这种情况常见于老式的721,722,7230等机型上,近几年出的岛津2550 系列,瓦里安的Carry系列,普析的1901系列等的新式仪器,仪器的波动一般比较小。如果出现这种情况,一般采用下面方式处理:
1. 分光光度计出现波动如何解决-首先确定待测溶液的稳定性
之前就有版友出现过这种情况,说吸光度波动很大,随时间的增加,吸光值减小/增大等的问题,先别怀疑仪器,假设仪器是稳定的,验证待测溶液是否稳定。如 果溶液不稳定,那就需要静置一段时间,等稳定了再测。这里我可以建议一点,就是做个简单的试验设计,以时间为横坐标,以吸光度为纵坐标,看看吸光度随时间 的变化曲线如何,等到稳定以后,下次记住这个时间,以后就直接静置这么长时间,直接测定了。
简单做了一个图,看看吸光度随时间的变化曲线,由图1可以看出,在0-11分钟,显色剂和组分还在反应,如果在这个时间段检测,吸光度肯定不稳定;在 11-13分钟时,吸光值基本稳定,可以上机检测;在13分钟以后,开始有点褪色了。所以,下次直接静置11-分钟后开始上机测定就可以了。
还有一点很重要,就是这种不稳定的情况能不能重复,即有没有重现性,如果没有重现性,那只能说明是偶然误差,可能由于电压不稳啊,震动等原因造成的。可重新测定一次或多次取平均值即可。
分光光度计出现波动如何解决
2. 检查是否操作不当
经常做试验的时候,有时候发现自己的数据不平行,俺就会反过来重头检查一下。首先检测比色皿在上机的时候是否擦拭干净。这个很重要,有时擦拭不干净,会 造成0.010左右的吸光值的偏差,即使是同一溶液上两次仪器,也会出现这种误差,主要是由于比色皿没有擦拭干净的原因。至于比色皿需要配对使用(对于老 仪器),或采用扣除池空白的方式(对于有此功能的新仪器),俺就不在此啰嗦了。
对于拉杆式的仪器,要将拉杆复位。俺就闹过一个笑话,印象很深刻的。一个颜色特别深的时候,上机发现吸光值为零。俺还检查了很多方面,看前处理是否出了问 题,看波长是否在zui大吸收处,是不是仪器不稳定,检查了一大圈,都没有问题啊,而且目视颜色很深啊。查来查去发现,仪器光路对准第二个比色皿位置,而俺的 样品溶液在*个比色皿位置上。哎,大家别笑话,真人真事,让大家见笑了。这里就要建议大家养成良好的习惯,使用完毕后一定要将拉杆复位,如果仪器不是一 个人使用,别人可能习惯不好,自己在试验的过程中一定要亲自检查一下。
分光光度计出现波动如何解决
3 . 电压不稳或光源不稳
上面两个方面都没 有涉及仪器本身的问题,下面说说仪器方面。若果1.1.1和1.1.2您都做的很好,那有可能出现以下问题。如果您所在实验室电压不稳,也有可能造成仪器 不稳定。据俺了解,仪器里面好像内置了稳压系统。如果检查出来是由于电压不稳定造成的,建议安装稳压电源等装置。这种情况好像比较少见啊。
光源问题是大家容易忽略的问题,首先看看氘灯和钨灯的能量图,如下:
图2 氘灯和钨灯的能量图
建议大家新仪器备份一个能量图,如果发现仪器不稳定的话,可以做一个能量图,和原来的能量图比较,看看能量是否下降的很厉害,如果下降的很厉害,可能是光 源出问题了,建议更换光源灯。尤其是氘灯,寿命一般比钨灯短,所以使用时更要注意,如只使用可见光区,等仪器自检完毕后,可利用软件关闭氘灯,这样可以节 省氘灯。如果在紫外区,且长时间不用的话,也可以暂时关闭氘灯。对于721等老仪器,没有氘灯使用计时等功能和能量扫描功能的仪器,可以自己设计一个氘灯 使用记录,每次记录氘灯使用的时间,等过了半衰期及时更换。
在更换光源的时候,首先建议让仪器厂家的人来更管。如果条件不许的话,自己更换,一定要带手套,装上以后要对灯的位置进行调节。
分光光度计出现波动如何解决:
4. 检测器问题
还有可能是检测器的问题,老仪器一般都用光电管作为检测器,新仪器一般都使用光电倍增管。无论那种,对检测器的保护,对仪器的保养一定要做好。之前由一个 版友仪器坏了,就是由于长时间不用,里面电子元件受潮老化导致。所以,要定期的对仪器进行维护,及时更换干燥剂,保持仪器干燥。长时间不用,可定期开机, 这样里面的电子元件本身会发热,驱除潮气。如果检测器坏了,就要请厂家的专业人员来更换了。
原子吸收分光光度计分为单光束型和双光束型。其结构可分为五个部分:光源、原子化器、光学系统、检测系统与数据处理系统。
1、光源
为测出待测元素的峰值吸收,须采用锐线光源,应满足以下一些要求:辐射强度大、辐射稳定、发射普线宽度窄。空心阴极灯是目前原子吸收光谱仪器使用的主光源,属于辉光放电气体光源。
空心阴极灯是一种由被测元素或含有被测元素的材料制成的圆筒形空心阴极和一个阳极(钨、钛或锆棒),密封在充有低压惰性气体的带有石英窗的玻璃壳内的电真空器件。
当在两极之间施加几百伏的高压,两极之间会产生放电,电子将从空心阴极内壁射向阳极,并在电子的通路上又与惰性气体原子发生碰撞并使之电离,带正电荷的惰性气体离子在电场的作用下,向阴极内壁猛烈地轰击,使阴极表面的金属原子溅射出来,而这些溅射出来的金属原子再与电子、惰性气体原子及离子发生碰撞并被激发,于是阴极内的辉光便出现了阴极物质的光谱。
空心阴极灯的阴极材料的纯度必须很高,内充气体也必须为高纯,以保证阴极元素的共振线附近不含内充气体或杂质元素的强谱线。
空心阴极灯的操作参数是灯电流,灯电流的大小可决定其所发射的谱线的强度。但是需根据具体操作情况来选择灯电流的大小。
通常情况下,空心阴极灯在使用前需预热10~15min。
2、原子化系统
原子吸收光谱中常用的原子化技术是:火焰原子化和电热原子化。此外还有一些特殊的原子化技术如氢化发生法、冷原子蒸气原子化等。
2.1火焰原子化系统——火焰原子化器
火焰原子化器由雾化器、雾化室、燃烧器三部分组成。常见的燃烧器有全消耗型和预混合型。目前主要使用的是预混合型燃烧器。
2.2 电热原子化系统——石墨炉原子化器
非火焰原子化器中适用广泛的是管式石墨炉原子化器。组成部分为:石墨管、炉体、电源。样品直接放置在管壁上或放置在嵌入管内的石墨平台上,用电加热至高温实现原子化。
3、光学系统
光学系统为光谱仪的心脏,一般由外光路与单色器组成。
外光路可以分为单光束与双光束。单光束系统中,来自光源的光只穿过原子化器,它的优点,能量损失小,灵敏度高,但不能克服由于光源的不稳定而引起的基线漂移。
传统双光束系统采用斩光器将来自光源的光分为样品光束与参比光束,补偿了基线漂移,但能量损失大。
单色器置于原子化器之后,这样可将空心阴极灯阴极材料的杂质发出的谱线、惰性气体发出的谱线以及分析线的邻近线等与共振吸收线分开并防止光电管疲劳。
由于锐线光源的谱线简单,故对单色器的色散率要求不高(线色散率为10-30/mm)。
4、检测系统与数据处理系统
检测系统包括检测器、放大器、对数转换器及显示装置等。光电倍增管是原子吸收光谱仪的主要检测器,要求在180-900nm测定波长内具有较高的灵敏度,并且暗电流小。目前通过计算机软件控制的原子吸收光谱仪具有很强的数据处理能力。
紫外可见分光光度计引用新型技术,其功能强大,采用单色器技术,波长范围190-1100nm,是各种涉及水和废水分析领域的通用仪器,应用范围包括市政和工业废水,饮用水,加工过程用水,地表水,冷却水和锅炉补给水等。
紫外可见分光光度计应用: 在水和废水监测中的应用,对于一个水系的监测分析和综合评价,一般包括水相(溶液本身)、固相(悬浮物、底质)、生物相(水生生物)。在水质的常规监测中,紫外可见分光光度法占有较大的比重。由于水和废水的成分复杂多变,待测物的浓度和干扰物的浓度差别很大,在具体分析时必须选择好分析方法。 在农产品和食品分析中可用于检测的组分或成分有蛋白质、赖氨酸、葡萄糖、维生素C、硝酸盐、亚硝酸盐、砷、汞等; 在植物生化分析中可用于检测叶绿素、全氮和酶的活力等; 在饲料分析中可用于检测烟酸、棉酚、磷化氢和甲酯等。 紫外可见分光光度计维护要点: 一、温度和湿度是影响仪器性能的重要因素。他们可以引起机械部件的锈蚀,使金属镜面的光洁度下降,引起仪器机械部分的误差或性能下降;造成光学部件如光栅、反射镜、聚焦镜等的铝膜锈蚀,产生光能不足、杂散光、噪声等,甚至仪器停止工作,从而影响仪器寿命。维护保养时应定期加以校正。应具备四季恒湿的仪器室,配置恒温设备,特别是地处南方地区的实验室。 二、环境中的尘埃和腐蚀性气体也会影响机械系统的灵活性、降低各种限位开关、按键、光电偶合器的可靠性,也是造成必须学部件铝膜锈蚀的原因之一。因此必须定期清洁,保障环境和仪器室内卫生条件,防尘等。 三、仪器使用一定周期后,内部会积累一定量的尘埃,可以由维修工程师或在工程师指导下定期开启仪器外罩对内部进行除尘工作,同时将各发热元件的散热器重新紧固,对光学盒的密封窗口进行清洁,必要时对光路进行校准,对机械部分进行清洁和必要的润滑,最后,恢复原状,再进行一些必要的检测、调校与记录。