一、生物显微镜的使用

　　(一)使用环境与工作习惯

　　1、使用环境

　　显微镜的工作场所应当清洁、干燥、无震动、无腐蚀性气体存在。

　　2、工作习惯

　　(1)台面和凳子的高度要适当。

　　(2)镜检时，即便用单目显微镜，也须两眼同时睁开，用左眼观察。以便右眼绘图或记录。如一只眼睁，一只眼闭，眼睛容易疲劳，无法久看。工作时间较长时，可两眼轮流观察。

　　(二)使用前的准备

　　1、光学系统的安装

　　对新购或已经卸掉光学系统的显微镜，使用前必须先将显微镜安装起来。安装时，为了防止向下掉灰尘，应按照先上后下的顺序，即按照目镜、物镜、聚光镜、反射镜的顺序来安装。图10-3-1为显微镜的安装图。箭头所示为光学元件的安装位置。

　　安装物镜时，应先将镜筒升高或载波物台下降，使转换器与载物台之间保持一定的距离。握往物镜，把它放入转换器的螺丝口处，先略向反时针方向旋转，待物镜配上丝纹后，再按顺时针方向旋入，旋至中等程度松紧即可。安装物镜时，应根据物镜的放大倍数，从小到大顺时针安装。转换物镜时，不要用手推着物镜旋转，那样会使物镜的光轴歪斜。用手捏着转换器的转动盘旋转，或用手扶着与物镜转换器衔接处的滚花外圆旋转。

　　目镜和物镜装好后，再将聚光镜插入载物台下面的聚光器支架内。插入的高度应使聚光器升至高时，聚光镜上透镜的端面稍低于载物台的平面，以免载玻片与聚光器的镜头相碰。然后，将聚光器的固定螺丝旋紧。对非电光源的显微镜来说，后要把反射镜插入聚光器下面的插孔内。

　　2、校正光轴

　　校正光轴的意义在于使物镜、目镜、聚光镜的主光轴和可变光栏的中心点重合在一条直线上。所以又叫做合轴调节或中心调节。如果光轴歪斜，会使像差增大，分辨率和清晰度都要下降。

　　检查方法是将可变光栏开至大，把低倍物镜旋入光轴，降低镜筒，使物镜与载物台之间的距离小于该物镜的工作距离(5mm以下)。不放标本，调节反射镜的角度，使视场亮;或调节光源灯的亮度，使视场明暗合适。

　　然后，拔掉目镜，直接从镜筒中观察。一边把可变光栏慢慢缩小或打开数次，当光栏关至小时，光栏的像(此时只有一点点)应正好落在物镜通光孔的中心。当光栏开大到一定程度时，光栏孔的像应正好与物镜通光孔的黑圈相重合。若符合上述两个条件，说明它们“合轴”。否则，就需要调整。

　　目镜和物镜都是固定的，无法进行调整。合轴调节主要是调整聚光镜的位置。有些显微镜聚光器支架两旁有两个光轴校正螺丝，调节这两个螺丝，即可合轴。另一种聚光器是由框架上三个相隔120°的螺丝支持住，其中一个装有弹簧，可以伸缩;另外两个螺丝，可以旋动。调整这两个螺丝，便可合轴。

　　显微镜的光轴校正好后，如果没有拆下聚光器或其它特殊原因，不必经常校正。

　　3、准备好标本

　　准备好高质量的标本备用。

　　(三)反射镜、聚光器的使用方法和对光方法1、调光

　　对采用反射镜的的显微镜，一般都使用平面反射镜去反射太阳的散射光。只有在光线不足或窗外有干扰时，才使用凹面反射镜。

　　采用电光源的显微镜，将光亮调合适即行。

　　2、聚光器的用法

　　(1)聚光器高度的调节 一般的聚光镜，在平行光照射的情况下，其焦点落在它上端透镜平面中心上方约1.25mm处。当使用高倍镜或油镜时，由于放大率大，镜像亮度小，需要较强的照明。因此，应把聚光器升至高，以便使聚光镜的焦点正好落在标本平面上。但在使用低倍物镜时，可将聚光器适当下降。

　　(2)可变光栏的用法 可变光栏起两个作用。一是控制射向标本的光通量;二是改变聚光器的数值孔径。在这两个作用中，后者是主要的。为了使物镜的分辨率得到充分的利用，从原则上说，聚光器的数值孔径应与物镜的相同。否则，分辨率或清晰度会受影响。

　　3、对光方法

　　对电光源显微镜来说，使用时，只要将光调节在合适的亮度即行。不需要进行对光。但对使用自然光的低档显微镜来说，要想获得良好的观察效果，必须充分利用照明光线。因此，镜检之前应先对光。对光时，将低倍镜旋入光轴，聚光器适当升高，可变光栏开至大。然后，从目镜中观察，同时转动反射镜，直至视场明亮、清晰为止。如果利用自然光，则尽量躲避窗框和窗外树枝的干扰。

　　(四)物镜的正确调焦

　　对光完成后或调节合适光亮后，升高镜筒或降低载物台，将标本玻片夹在移动器即标本夹上，并将欲检查的部分移至载物台通光孔的中央，然后开始调焦。

　　无论作何种检查，均应从低倍镜开始。调焦时，先用粗动手轮将镜筒下降，使低倍镜的前透镜与盖玻片之间的距离略小于该物镜的工作距离(5mm以下)。为了避免物镜压在标本玻片上，可从侧面窥视。然后，一边从目镜中观察视野，一边利用粗动手轮将镜筒徐徐上升，待初见物像后，改用微动手轮作精细调焦，直至物像清晰为至。低倍物镜的视场大，有利于观察标本的全貌。也可利用移动器或纵、横向调节手轮寻觅所观察的目标。如有必要，可将寻得的目标移至视场的中心，为高倍镜观察作好准备。

　　从低倍物镜转换为高倍物镜时，如果物镜是显微镜的原配，所用的载玻片、盖玻片又符合标准，一般都可以进行“等高转换”。即转换后，只要稍微调节一下微调旋钮，即可看到清晰的图像。但油镜不强求齐焦，先将镜筒升高后再转换，后按低倍镜的调焦方法重新调焦。

　　使用油镜的方法如下：先将镜筒升高，取下标本玻片，稍稍降低聚光器，并在聚光器的镜头上滴两滴香柏油(油中不应有气泡。如有，可用小木签除去)，再将标本玻片放回原处，把聚光器升高，使载玻片的底面与香柏油接触。这样，就完成了聚光镜的油浸。接着，在盖玻片上滴上1滴香柏油。然后从侧面窥视，利用粗调使镜筒尽量下降，直至油镜的前透镜浸没在香柏油中(但尚未接触玻片)，这样，又完成了物镜的油浸。然后，一边从目镜中观察，一边利用微动手轮将镜筒缓缓上升(注意不要拧错了方向，压碎盖玻片)，直至视野中出现清晰的物像为止。

　　聚光镜的油浸，还可以采用另一种滴油方法：即不直接把油滴在聚光器的镜头上，而是把载玻片翻过来，将油滴在载玻片的底面上，然后再翻过去，对准放置于聚光器上面，再使聚光器上升，来完成聚光器的油浸。这种方法虽然不那么顺手，但比较安全。有些人使用玻璃棒直接与聚光镜接触来涂抹香柏油，这种方法容易划伤镜片，不宜采用。

　　在使用油镜时，允许在聚光镜与标本之间不加香柏油，即聚光镜上仍以空气为介质，但这会牺牲物镜的分辨率。

　　如用油镜观察后，如又需要转回高倍物镜观察，应将盖玻片上的油擦去，以免沾污高倍物镜。但聚光器上的油可以不擦，只要把光栏适当缩小一点即可。

　　油镜使用完毕后，要及时将香柏油擦拭干净。镜头上可先用干净的擦镜纸擦1～2次，把大部分的油擦掉。然后用二甲苯滴湿的擦镜纸擦两次，后用擦镜纸擦干净即行。聚光镜的擦拭方法与此相同。如标本需要保存，玻片上的香柏油可用“拉纸法”擦拭干净。即将擦镜纸复盖在玻片上，在纸上滴上一滴二甲苯，趁湿将纸条平拖着往外拉，连续几次即可擦干净。