无论气相还是液相，色谱柱都是分离的核心。液相色谱柱的固定相可以说是五花八门，有C18，C8，C4，苯基柱，氰基柱，氨基柱等等。色谱柱使用的好坏，直接关系到分析分离的结果，我们都知道氨基柱有使用寿命短等问题，今天在这里给大家带来氨基柱的使用维护指南，希望通过更好的维护使用，让我们手中的色谱柱发挥出更大的作用。
说起氨基柱，大家熟悉的是拿它来做糖的分析。这是一个典型的HILIC模式。除了HILIC模式以外，氨基柱还可以用做正相和弱阴离子交换两种模式。可以说应用范围和模式非常广。
ThermoFisher色谱柱系列大家族中拥有三款氨基键合相的色谱柱，分别是Hypersil GOLD Amino、Syncronis Amino和Hypersil APS-2。有人会问，都是氨基柱，他们的区别又在哪里呢?
让小编来给大家一一做个介绍。Hypersil Gold Amino这款氨基柱具有更对称的峰型，在生产工艺上有更致密的键合技术，硅胶表面残存的硅醇基数量低。Syncronis Amino这款氨基柱金属杂质含量在同类色谱柱中低，能够带来更高的柱效,而Hypersil APS-2这款氨基柱在分离多组分化合物时更具优势，并且在美国药典和欧洲药典中多有应用。说了这么多我们看看下面该如何使用维护。
保存液
（Gold Amino和Syncronis Amino）出厂保存液为乙醇，APS-2柱出厂保存液为：异辛烷：乙醇：水=85:14.7:0.3，新色谱柱如果使用反相流动相条件，请充分置换色谱柱内正相溶剂。
活化
新色谱柱如果使用HILIC模式，使用前请使用异丙醇小流速过夜平衡色谱柱。流速建议0.1mL/min,之后再转换到100%乙腈冲洗20柱体积，然后转换到和流动相相同比例的不含盐的乙腈水体系冲洗20柱体积。
冲洗
用乙腈：水=60:40条件对色谱柱进行清洗，清洗时，不建议水相比例超过40%，过高使用水相容易导致键合相水解。
色谱柱再生
当色谱柱经过长时间使用，柱效很低时，可以对色谱柱再生处理，用乙腈：水（水中加入0.05%氨水）=60:40条件冲洗30柱体积。
保存
一个月以内的保存，请使用与所选用流动相组成相同的有机溶剂和水的混合溶液（不含酸、无机盐）进行置换，请避免只用水进行置换；一个月以上的长期保存，在进行了上述处理之后，请用乙腈置换并保存。
氨基柱糖类的分析
1
请设定乙腈/水的流动相条件。乙腈的浓度越高，则对糖的保留能力越强。
2
若采用含甲醇或缓冲盐的流动相，峰会展宽。
3
若将糖的水溶液作为样品注入，谱峰会展宽。请使用含乙腈50%以上的溶剂来配制糖类样品。
4
曾在酸性条件下使用过的色谱柱，糖类分析的保留时间、峰形会发生变化。
离子型物质的分析
1
请设定乙腈/磷酸缓冲液且具有一定pH值的流动相条件。
2
考察流动相条件时，按照pH由高到低的顺序进行考察。如果曾经在低pH下使用，填料的表面将无法回到初始状态。
3
有时需要长时间平衡色谱柱(24小时以上)。平衡所需时间与通液量和盐浓度紧密相关，因此，时间紧急时请提高流速，或pH不变而增加流动相的盐浓度来进行平衡。
色谱是一种分离分析手段，分离是核心，因此担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏。对色谱柱的要求是柱效高、选择性好，分析速度快等。
一、物理因素：
(1)硅胶纯度：硅胶纯度和残留金属离子浓度，硅胶的杂质会影响化合物的峰形，硅胶表面的金属含量高会影响碱性化合物的峰形，易发生拖尾。
(2)色谱柱尺寸填料床的长度和内径，增加色谱柱长度，可以在一定程度上提高柱效，但也会升高压力和导致峰展宽；宽柱径，提高载样量，但也会增加横向扩散，同样会导致峰展宽。窄柱径可以节约溶剂，可减少横向扩散，但压力较大，对系统要求较高。
(3)颗粒形状及粒径球形颗粒柱效高、重现性好、柱床结构均匀，不规则形柱床结构不均匀、流动相线速度不均匀，容易谱带展宽；平均颗粒直径，粒径越小，柱效越高，柱压也越高。粒径分布越广则柱效越低，压力越大。
(4)颗粒表面积：颗粒外表面和内部孔表面的总和，以m2/g表示，相对而言高表面积对样品具有较强的保留能力，更大的柱容量和分离度。而低表面积能更快达到平衡状态，更适合梯度洗脱程序。
(5)孔径：颗粒的孔或腔的平均尺寸，范围是80~300?，大孔径的填料颗粒可以延长大分子溶质在填料表面的滞留时间，改善分离，所以大孔径填料适合分离大分子化合物或者水动力体积较大的分子。
二、化学因素：
(1)键合类型及键合相：键合相分子与基体单点相连为单体键合，这种键合方式可以提高传质速率，缩短柱平衡时间；聚合体键合为键合相分子与基体多点相连，这种键合方式可以增加色谱柱稳定性，增加载样量。而键合相不同会直接影响化合物的保留行为。
(2)碳覆盖率：高碳覆盖率可以提高分辨率和重现性，但分析时间长。
(3)封端：硅胶键合相填料中有部分未封端的残留硅羟基，如图封端可以减轻待测组分与硅胶表面残留的酸性硅羟基反应，改善保留和峰行，这对于碱性化合物尤其重要。而不同的封端技术也会直接影响色谱柱的效能。
在我们平常的工作当中，液相色谱柱的正确使用和维护十分重要，液相色谱柱使用是否得当，直接影响液相色谱柱的寿命，稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。
在液相色谱操作过程中，我们需要了解下面的问题，方便维护液相色谱柱。
1.柱子在装卸、更换时，动作要轻，接头拧紧要适度。必须防止较强的机械振动，以免柱床产生空隙。
2.如果仪器用来做常规分析，样品种类有限，但分析次数多，则不妨为每一类常规分析配置一根专用柱，这样有助于延长柱子的寿命。
3.避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的突然变化或者使液相色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况;柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调节流速时应该缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓。
4.应逐渐改变溶剂的组成，特别是反相色谱中，不应直接从有机溶剂改变为全部是水，反之亦然。
5.如使用柱温控制装置时，应注意在通人流动相后才能升温。
6.一般说来液相色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效。
7.选择使用适宜的流动相，以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前面连接一个预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”，避免分析柱中的硅胶基质被溶解。
8.避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注人柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一个保护柱。保护柱一般是填有相似固定相的短柱。保护柱可以而且应该经常更换。
9.经常用强溶剂冲洗液相色谱柱，清除保留在柱内的杂质。在进行清洗时，对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡，每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右，即常规分析需要50-75mL。
10.保存液相色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇，柱接头要拧紧，防止溶剂挥发干燥。绝对禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。
11.液相色谱柱使用过程中，如果压力升高，一种可能是烧结滤片被堵塞，这时应更换滤片或将其取出进行清洗；另一种可能是大分子进人柱内，使柱头被污染;如果柱效降低或色谱峰变形，则可能柱头出现塌陷，死体积增大。
12.在完成分离分析工作之后，不能马上就关机，需及时对色谱分析系统进行冲洗，一般0.5h以上，以除去液相色谱柱内的杂质。
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