每天用足够的时间来维护色谱柱，您将节省更多用于处理色谱柱故障的时间，同时您的色谱柱的寿命也会变得更长！色谱柱的使用寿命，除了与所分析的样品和流动相及使用频率有关外，主要的是与日常的维护密切相关。色谱柱的使用寿命主要是根据柱效和柱压两个指标来衡量，如果一支色谱柱柱效太低或柱压太高，通常被认为该色谱柱的使用寿命已经结束。因此，延长色谱柱使用寿命的关键是，消除引起柱效下降和柱压升高的因素。通过以下几点帮助您完成色谱柱的日常维护工作。
流动相的pH 值
由于硅胶基质的填料中存在Si-C和Si-O键，流动相超过其pH范围将会导致硅胶基质溶解和键合相碳链断裂，使柱效下降，寿命变短。由于流动相的pH控制不当而对色谱柱造成的损害，通常很难使色谱柱恢复，因此必须认真对待，严格控制流动相的pH值。。
去除样品和流动相中的固体颗粒
样品和流动相中含有的固体颗粒物质会堵塞色谱柱筛板，筛板被堵不仅会引起柱压升高，而且也会引起柱效下降，因为筛板的堵塞会引起液流不均，导致色谱峰形拖尾、变宽，甚至出现双峰，从而使柱效下降。因此，建议使用超纯水和色谱纯试剂，在分析前对样品进行超声、针筒过滤，流动相过0.45µm 滤膜，尤其是流动相加入了缓冲盐（如NaH2PO4等），必须过滤。
博纳艾杰尔为您提供了一系列高质量的过滤产品，外壳采用聚丙烯材料，滤膜为意大利进口。种类有：混合纤维素（MCM）、尼龙（Nylon）、聚四氟乙烯（PTFE）、聚偏氟乙烯（PVDF）、 聚醚砜（PES）、增强型纤维素膜（Reg. Cellulose）、玻璃纤维、PP等，常用规格为：直径13mm、25mm、33mm；孔径：0.45µm、0.22µm等。
使用保护柱或在线过滤器
样品和流动相经过滤后并不能完全消除固体颗粒物质，因为泵的磨损、密封圈和管路的老化也会产生固体颗粒物，这些固体颗粒被流动相带入色谱柱，堵塞筛板，导致柱压升高、柱效下降。保护柱和在线过滤器上都有筛板，其孔径与色谱柱筛板孔径相同，因此可以阻止固体颗粒物质到达色谱柱，有效防止色谱柱筛板的堵塞。由于柱压升高在分析故障中占很大比例，因此，除对样品和流动相进行过滤外，建议您在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器。
正确使用缓冲盐
缓冲液可以提供离子平衡的反离子，并使流动相保持一定的离子强度和p H 值，减少拖尾。缓冲盐通常易溶于水，难溶于有机溶剂，因此缓冲盐使用不当会致其析出，堵塞填料基质上的微孔和颗粒间的空隙，使填料板结，柱压上升；同时阻碍了基质上键合的碳链自由舒展，使色谱柱的保留能力下降，柱效降低。缓冲盐析出后，去除非常困难，因此，正确的使用缓冲盐对延长色谱柱使用寿命非常重要。
正确使用缓冲盐的目的是防止缓冲盐析出，因此正确使用缓冲盐的方法可归结为一句话：使用前要过渡，使用后要冲洗。
具体方法如下：
a . 等度条件：使用缓冲盐前用过渡流动相以1.0mL/min 流速冲洗20-30倍柱体积，然后再使用含有缓冲盐的流动相；使用后去除缓冲盐的方法是用过度流动相以1.0mL/min流速冲洗30倍柱体积，然后以纯有机溶液冲洗30倍柱体积保存。
b .梯度条件：用含有缓冲盐的流动相进行梯度洗脱之前，用与初始流动相组成相同的过渡流动相以1.0mL/min流速冲洗30倍柱体积，再开始梯度的运行；分析完成后，再用过渡流动相以1.0mL/min冲洗色谱柱30倍柱体积，然后以纯有机溶液冲洗30倍柱体积保存。
另外，在使用缓冲液的过程中还要注意以下几点：
a .避免使用盐酸盐，盐酸盐对钢质有腐蚀作用；
b .缓冲液需现配现用，往往缓冲液是良好的菌类培养液，隔天或放置长时间实验时会发生很多怪现象；
c .使用缓冲液要及时掌握pH范围，做到胸中有数；
d .清洗液路和柱子时，有温控可加热到30摄氏度易于冲洗；
e.长时间用缓冲溶液要注意观察接头处有无析出，若有白色盐类析出，定期用10%硝酸冲洗液路（拆下柱子，冲洗30mL10%硝酸溶液，再用5倍水冲洗）可以避免液路的堵塞；
f.选择缓冲液要用可靠的试剂，避免不纯的盐类造成不必要的麻烦；
过渡流动相是指有机相和水相的组成与分析流动相相同，但是不含缓冲盐的溶液。
防止强保留物质在色谱柱中存留
强保留物质和大分子化合物在色谱柱中累积，对样品中的化合物产生额外的保留行为，不仅引起峰形变宽、拖尾，使柱效下降，同时也会引起保留时间的变化，累积到一定程度时还会导致柱压升高。由于强保留物质和大分子化合物对色谱分离的影响是一个累积效应，需要一定的时间才会体现出来，但对许多样品特别是复杂样品而言，很难判断其是否含有强保留物质，因此要防止强保留物质的累积，需要在每天的日常维护中用纯甲醇或乙腈30倍柱体积清洗色谱柱。
色谱柱的再生
a、反相柱
以下列溶剂顺序冲洗30倍柱体积
乙腈－水（5:95） → THF → 乙腈－水（5:95）
b、正相柱
以下列溶剂顺序冲洗30倍柱体积
正己烷 → 二氯甲烷 → 异丙醇 → 二氯甲烷 → 流动相
c、硅胶柱（Si）除水
30mL 2.5% 2,2 二甲氧基丙烷和2.5%冰醋酸正己烷溶液冲洗柱子
制备液相色谱中，有三个可以观察到的状态：柱压、检测器基线、谱图。通过观察和记录这三个状态可以监测仪器是否正常。若某个状态出现异常，故障排查和解决方案如下。
1、柱压波动
1）吸液管路进气泡
①溶剂不足，吸滤头吸入空气，添加溶剂并排气泡。
②吸滤头脏了或堵塞，用异丙醇（或5%稀硝酸）清洗。
③溶剂中有气泡（尤其两种以上溶剂混合），超声（或抽滤）脱气。
2）泵流量不稳
①单向阀堵塞，大流速purge，若不能解决，则需拆下单向阀（异丙醇）超声清洗清洗或更换单向阀。
②柱塞密封圈磨损，更换密封圈。
③泵头污染，柱塞杆往复活动受阻，清洗泵头。
3）柱床塌陷，维修或更换色谱柱。
4）流动相混合后吸放热导致温度变化，以致柱压波动，如乙腈和水混合吸热，甲醇和水混合放热。若影响实验结果，则增加柱温箱或流动相预混。
2、柱压升高或超压。
逐段排查堵塞的位置：
1）先拆下色谱柱，接上两通运行，若是色谱柱堵塞：
①进样后样品析出，用合适的溶剂反冲色谱柱。
②缓冲盐析出，用大比例水相的流动相冲洗色谱柱。
③机械杂质堵塞筛板，异丙醇小流速反冲色谱柱。
④色谱柱污染严重，需维修或充填。
2）混合器堵塞，维修或更换。
3）六通阀堵塞，将泵液管路接到连接色谱柱的阀口处，将阀扳至load状态，用易溶样品的溶剂小流速冲洗。
4）压力传感器故障，维修或更换。
3、检测器基线波动
1）基线有规律波动，且幅度较大，则可能有气泡持续进入流通池。排查气泡来源并用异丙醇冲洗检测器或色谱柱。
2）基线小幅度规律波动，可能是检测器灯能量不足（能量下降后，低波长下灵敏度先下降。
3）基线漂移。
①流动相在此检测波长下有吸收。更换流动相或改变波长。
②色谱柱或检测池污染。以异丙醇冲洗色谱柱或检测池，或将检测池中透镜玻片取出清洗。
4、谱图重现性差
1）检查方法设置，包括流速、梯度、波长。
2）检查流动相配置是否有误，A、B两相是否放反。
3）检查柱压与之前是否有差异，若有变化，则前面1和2进行排查。
4）进样前色谱柱是否完全平衡好。
5）样品溶解方法。
1、反相柱
分别用甲醇:水=90:10，纯甲醇（HPLC级），异丙醇（HPLC级），二氯甲烷（HPLC级）等溶剂作为流动相，依次冲洗，每种流动相流经色谱柱不少于20倍的色谱柱体积.然后再以相反的次序冲洗。
2、正相柱
分别用正己烷（HPLC级），异丙醇（HPLC级），二氯甲烷（HPLC级），甲醇（HPLC级）等溶剂做流动相，顺次冲洗，每种流动相流经色谱柱不少于20倍的柱体积(异丙醇粘度大，可降低流速，避免压力过高).注意使用溶剂的次序不要颠倒，用甲醇冲洗完后，再以相反的次序冲洗至正己烷，所有的流动相必须严格脱水。
3、离子交换柱
长时间在缓冲溶液中使用和进样，将导致色谱柱离子交换能力下降，用稀酸缓冲溶液冲洗可以使阳离子柱再生，反之，用稀碱缓冲溶液冲洗可以使阴离子柱再生。
另外，还可以选择能溶解柱内污染物的溶剂为流动相做正方向和反方向冲洗。但再生后的色谱柱柱效是不可能恢复到新柱的水平的.如果柱子装反了，可以调回来，但可能会造成柱内担体塌陷.在不得已的情况下尽量不要反装色谱柱。
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