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安捷伦液相色谱仪常见问题解决方案 液相色谱解决方案

时间:2020-06-03    来源:仪多多仪器网    作者:仪多多商城     

    1、基线波动的原因?

    基线波动有可能与实验室的温度及湿度变化有关系。需确保室温及湿度稳定,将安捷伦液相色谱仪从通风橱中取出,并将色谱柱和毛细管进行隔热保温。

    2、安捷伦液相色谱仪-什么原因导致基线毛刺?

    这很有可能是流动池内有气泡。请先停泵来进行确认,如果毛剌消失,则很有可能是由于流动池内有气泡。需要冲洗流动池。如果毛剌仍然存在,则需检查检测器本身的电噪音有关。

    3、如何减少基线噪音?

    无规律噪音可能与污染有关。请冲洗色谱柱,对样品做合适的前处理以避免污染,并使用HPLC级别的溶剂。连续噪音有可能由检测器或泵造成。要确定问题是否发生在检测器还是在泵,请先关泵停掉流量,监测基线。如果此时基线平稳,则噪音可能与泵有关系。使用ChemStation在线诊断或LC手持控制器检查泵方面的故障。如果停泵后噪音继续存在,则说明噪音与检测器有关。首先,请尝试更换灯。如果问题依然存在,则请厂家联系联系。

    4、如何避免液相基线飘移?

    基线向上飘移表明系统中有污染。请冲洗色谱柱,净化样品,然后使用新溶剂。向下飘移通常是由于检测室或柱箱中的温度波动的原因。减小室温变化,将仪器从通风橱中取出,并将色谱柱和毛细管保温隔热。向下飘移也可能由于溶剂的纯度不是HPLC级别的溶剂而且此纯度低的溶剂在紫外有吸收。

    5、如何排除流动相/流动池中的气泡?

    避免流动相中产生气泡的方式是将流动相经脱气装置进行脱气。如果没有脱气装置,则可以在流动相溶剂瓶中通入氦气进行脱气。也可以在检测器的出口端加一根细管线以调节流动池中的背压,但必须注意不要超过流动池的最大压力,否则会造成流动池漏液或流动池损坏。如果流动池中出现气泡,则先摘下色谱柱,用一根管线直接将流动相接入检测器的入口。将异丙醇以较大的流速注入流动池。直到基线上看不到尖峰为止。气泡就应该清除掉了。

    液相色谱仪的原理就是利用待分离的各种物质在两相中的分配系数、吸附能力等亲和能力的不同来进行分离的。使用外力使含有样品的流动相气体、液体、通过一固 定于柱中或平板上、与流动相互不相溶的固定相表面。当流动相中携带的混合物流经固定相时,混合物中的各组分与固定相发生相互作用。    液相色谱仪的保养:    1、至少每天进行一次检漏。    2、泵正在带压工作时,不可拆卸其部件除非有经验的维修人员在进行故障处理、。    3、配制两种或两种以上洗脱液时,一定要先脱气再使用,保证流动相系统中不要形成气泡。    4、定期检查泵的润滑,只使用仪器说明书指定的润滑油。    5、定期检查检测器噪声、漂移,定期进行检测器校正。    6、除非实践证明其它纯度级别的溶剂可用,否则使用高效液相色谱流动相专用试剂。    7、更换溶剂时,一定要对系统进行冲洗。如果两种溶剂互不相溶,则应先用与这两种溶剂都能互溶的溶剂进行冲洗,再用新溶剂进行冲洗。    8、柱子不论何时都不能拆卸下接头,以免损失柱效,废掉柱子。

高效液相色谱仪的组成与特点

  高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中做相对运动时,经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。

  高效液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统,下面将分别叙述其各自的组成与特点。

  1.进样系统 一般采用隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作,进样量是恒定的。这对提高分析样品的重复性是有益的。

  2.输液系统 该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。高压泵的一般压强为l.47~4.4X107Pa,流速可调且稳定,当高压流动相通过层析柱时,可降低样品在柱中的扩散效应,可加快其在柱中的移动速度,这对提高分辨率、回收样品、保持样品的生物活性等都是有利的。流动相贮存错和梯度仪,可使流动相随固定相和样品的性质而改变,包括改变洗脱液的极性、离子强度、PH值,或改用竞争性抑制剂或变性剂等。这就可使各种物质(即使仅有一个基团的差别或是同分异构体)都能获得有效分离。

  3.分离系统 该系统包括色谱柱、连接管和恒温器等。色谱柱一般长度为10~50cm(需要两根连用时,可在二者之间加一连接管),内径为2~5mm,由"优质不锈钢或厚壁玻璃管或钛合金等材料制成,住内装有直径为5~10μm粒度的固定相(由基质和固定液构成).固定相中的基质是由机械强度高的树脂或硅胶构成,它们都有惰性(如硅胶表面的硅酸基因基本已除去)、多孔性(孔径可达1000?)和比表面积大的特点,加之其表面经过机械涂渍(与气相色谱中固定相的制备一样),或者用化学法偶联各种基因(如磷酸基、季胺基、羟甲基、苯基、氨基或各种长度碳链的烷基等)或配体的有机化合物。因此,这类固定相对结构不同的物质有良好的选择性。例如,在多孔性硅胶表面偶联豌豆凝集素(PSA)后,就可以把成纤维细胞中的一种糖蛋白分离出来。

  另外,固定相基质粒小,柱床极易达到均匀、致密状态,极易降低涡流扩散效应。基质粒度小,微孔浅,样品在微孔区内传质短。这些对缩小谱带宽度、提高分辨率是有益的。根据柱效理论分析,基质粒度小,塔板理论数N就越大。这也进一步证明基质粒度小,会提高分辨率的道理。 再者,高效液相色谱的恒温器可使温度从室温调到60C,通过改善传质速度,缩短分析时间,就可增加层析柱的效率。

标签: 高效液相色谱仪
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