色谱柱的柱效能是评价色谱性能的一项重要指标,混合物能否在色谱柱中得到分离,除取决于选择合适的固定相外,还与色谱操作条件及色谱柱的装填状况等因素有关。在一定的色谱操作条件下,色谱柱的柱效可用理论塔板数或理论塔板高度来衡量。要提高液相色谱的效率可从以下几方面入手。
(1)降低移动相的流速,但会使分析时间延长。
(2)减少固定相的量,但色谱柱中样品的负载量也随之减小。
(3)减小固定相的颗粒度,但不能过分,过分后色谱柱的渗透率也会减小。
(4)选用低粘度的移动相,以利于快速传质,但却不利于多组份分析。
(5)适当提高柱温,可降低移动相的粘度,但柱效和分离度也随之降低。
(6)尽量减小停滞移动相的体积,但却加快了移动相的流速。
从以上介绍可看出,在色谱分析过程中,各种因素是互相联系和制约的。只有通过对柱效值的跟踪测算,对自己分析方法不断的研究和实践,才能找到较佳的工作条件。
高效液相色谱仪的原理:
造成液相色谱仪流动相供给不畅的原因可能是:流动相已经接近用完了,管路中吸入气体引起泵压力不稳定。 应经常观察贮液器中流动相的量,加足流动相保证所有样品分析完毕。输液管路上安装沉子至瓶底,贮液器盖上留一小孔正好夹住进液器,使其不能上下移动。 过滤器阻塞会引起管道和泵腔真空变化,使压力不稳。当过滤器被微粒所阻塞或长霉时,去掉过滤器后系统会运转正常,换上新的过滤器即可,有时候换上新过滤器任然不畅,那么就需要检查流动相的制备过程,或者换上大孔径的过滤器。不管如何,流动相都要重新过滤。 流速过高、阻力大,造成真空化现象,这是由于过滤器孔径、管道内径、流速和溶剂粘度等引起的。如果流速大于10mL/min,常会出现这种现象,试着用下列方法解决。 1、试用低流速,若问题解决了则再进行下一步; 2、换大孔径的过滤器; 3、增加进液管内径; 4、抬高或加压贮液器; 5、改低流速; 6、不用入口过滤器(但流动相一定要先过滤)。 当贮液器盖子太紧,在贮液器内形成真空,打出的流动相不连续。应松开盖子或留有1mm缝隙。 进液管路阻塞或弯曲折叠会使泵抽不到液,注意调整进液路道或更新。