阳离子色谱柱是高效液相色谱的一种,是分析阴阳离子的一种液相色谱方法,该方法具有选择性好、灵敏、快速、简便等优点,并且可以同时测定多种组分。
阳离子色谱柱的进样系统
离子色谱的进样主要分为3种类型:即气动、手动和自动进样方式。
手动进样阀
手动进样采用六通阀,其工作原理与HPLC相同,但其进样量比HPLC要大,一般为50μL。样品首先以低压状态布满定量管,当阀沿顺时针方向旋至另一位置时,即将贮存于定量管中固定体积的样品送进分离系统。
气动进样阀
气动阀采用一定氦气或氮气气压作动力,通过两路四通加载定量管后,进行取样和进样,它有效地减少了手动进样因动作不同所带来的误差。
自动进样
自动进样器是在色谱工作站控制下,自动进行取样、进样、清洗等一系列操纵,操纵者只须将样品按顺序装进贮样机中。圆盘式自动进样的工作步骤如下:
(1)电机带动贮样盘旋转,待分析样品置于取样针正下方。
(2)电机正转,丝杆带动滑块向下移,把取样针插进样品塑料盖,滑块继续下移,将瓶盖推进瓶内,在瓶盖挤压下样品经管道流进进样阀定量管,完成取样动作。
(3)进样阀切换,完成进样。
(4)电机反转,丝杆带动滑块上移,取样针恢复原位。
自动进样可以达到很宽的样品进样量范围的目的。
色谱柱是高效液相色谱的心脏,在高效液相色谱仪的使用中,保持色谱柱的柱效、容量和渗透性,延长柱子的使用寿命非常重要。色谱柱压升高一般是由于柱床内产生了杂质,造成流体阻力加大所致。浅析其原因,大致有以下几方面:
流动相的前处理
杂质堵塞色谱柱进口滤片,导致压力升高。这往往是由于流动相没有过滤,或虽已过滤但过滤不彻底,使固体杂质滞留于滤板上所造成的。
样品的沉淀
当溶解样品的溶剂与流动相不一致时,样品进入色谱柱,有时可能因溶解度降低而沉淀出来,造成压力升高。
晶体的析出
使用含有缓冲液的流动相时,缓冲液中的无机盐可能会残留在体系之中,它们会因在新流动相中的溶解度降低而析出,造成流体阻力加大、压力升高。
细菌或霉菌孳生
霉菌在流动相中、管路中或柱子进口处繁殖、生长堵塞滤板,导致压力升高。所以在使用磷酸盐缓冲液时一般要现配现用。
溶质吸附
当溶质在柱子上有较强的吸附,且所用的流动相难以将它们洗脱时,累积的未洗脱溶质也会造成阻力增大和压力升高。
流动相更换过度较快
当改变流动相体系时,不彻底的更换使不同性质、互不混溶的流动相存在于同一个体系之中,也会造成压力升高。
压力脉冲
运行过程中,有时会产生系统内压力的突然升降。如此所形成的压力脉冲会造成多孔填料的崩坏和柱床结构的微小变化,填料微屑的长期积累也可能会使柱床阻力增大,造成压力升高。