高效液相色谱法测定胍西替柳片的含量 液相色谱解决方案

胍西替柳为消炎镇痛药，其制剂有胶囊剂及新研制的片剂。胍西替柳胶囊的含量测定方法为酸碱滴定法，先用氯仿提取后，再用酸碱滴定法测定，此方法较繁琐，测定误差较大。本文采用高效液相色谱(HPLC)法，不需要提取，可直接测定且辅料无干扰。本法操作简便，专属性强，结果准确。  1 仪器与试药    仪器：依利特P230系列HPLC仪；UV230检测器。EC2000工作站。试药：胍西替柳片(大连弘丰制药厂)，胍西替柳对照品(大连弘丰制药厂)。甲醇为色谱纯。 2 实验方法与结果  2．1 系统条件与系统适用性色谱柱：迪马公司Cl8(150mmx4.6mm，5μm)，流动相：甲醇-水(70：30)，流速为1.0ml／min，检测波长为276nm，柱温：室温，进样量：10μl。理论板数按胍西替柳应不低于2800[n=5.54(tR／Wh／2)的平方]。  2．2 标准曲线的制备    精密称取胍西替柳对照品22.04mg，置25ml量瓶中，加甲醇10ml溶解，加流动相稀释至刻度，摇匀，分别精密量取0.2，0.6，1.0，1.4，1.8ml，用流动相稀释至10ml，摇匀，照上述色谱条件测定。以进样量(ug)为横坐标， 峰面积 为纵坐标，进行线性回归，回归方程为Y=922382X一424.9，r=0.99996，结果表明，在进样浓度依次为0.18～1.59ug范围内线性关系良好。 2．3 回收率试验取相当于胍西替柳20mg处方量的80％，100％，120％，精密称定，分别加入相应量的混合辅料，置9个25ml量瓶，加甲醇溶解并稀释至刻度。摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，加流动相稀释至10ml，摇匀，照上述色谱条件测定，计算胍西替柳的回收率。  2．4 精密度试验 精密称取同一批号的供试液，按“2．7&”项下方法制备后，连续进样5次，测定峰面积 ，计算胍西替柳的含量，考察仪器精密度，结果表明，仪器精密度良好，其RSD为0.88％。 2．5 重复性试验精密称取同一批号5份样品， 按“2．7”项下方法制备后，在上述色谱条件下进行分析，计算胍西替柳的含量，考察方法重复性，结果表明，方法重复性良好，其RSD为0.9％。 2．6 溶液稳定性试验 取胍西替柳样品溶液，室温下放置，按上述色谱条件，分别于0，2，4，6，8h进样分析，记录色谱峰面积，胍西替柳峰面积的RSD为0.81％。结果表明，室温下供试品溶液在8h内是稳定的。 2．7 样品测定取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于胍西替柳20mg)，置25ml量瓶中，加甲醇适量，使胍西替柳溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密计算含量。 讨论 3．1溶剂的选择经试验，胍西替柳在酸、碱中均不稳定，在水中不溶，在甲醇中溶解。所以样品先用甲醇溶解，再用流动相稀释成测定浓度。 3．2 检测波长的选择取 胍西替柳对照品适量，加甲醇制成每1ml中含80μg的溶液，在400～200nm范围扫描，在276nm波长处有最大吸收且辅料无干扰，故检测波长定为276nm。 3．3 流动相的选择 我们曾先后选择了甲醇-水(30：70)，甲醇-水-(55：45)，甲醇-水(70：30)作为流动相的样品进行分析，结果较佳的流动相为甲醇-水(70：30）

通用型反相液相色谱柱特性：

* 填料表面具有极性基团，适合于高水相流动相条件下的分离；

* 增强了对亲水性、极性化合物的保留能力；

* 独特的选择性和优异的分离度；

* 降低了碱性化合物与残余硅羟基的相互作用，提高了色谱峰的对称性；

* pH 范围1.5 - 10.0，适合于分析酸、碱化合物。

 

通用型反相液相色谱柱在使用缓冲液的过程中还要注意以下几点：

　　a.避免使用盐酸盐，盐酸盐对钢质有腐蚀作用;

　　b.缓冲液要现配现用，往往缓冲液是良好的菌类培养液，隔天或放置长时间实验时会发生很多怪现象;

　　c.使用缓冲液要及时掌握pH范围，做到胸中有数;

　　d.清洗液路和柱子时，有温控可加热到30摄氏度易于冲洗;

　　e.长时间用缓冲溶液要注意观察接头处有无析出，若有白色盐类析出，定期用10%硝酸冲洗液路(拆下柱子，冲洗30mL10%硝酸溶液，再用5倍水冲洗)可以避免液路的堵塞;

　　f.选择缓冲液要用可靠的试剂，避免不纯的盐类造成不必要的麻烦;

　　过渡流动相是指有机相和水相的组成与分析流动相相同，但是不含缓冲盐的溶液。