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【薄层色谱】薄层色谱四个常见问题

时间:2020-06-12    来源:仪多多仪器网    作者:仪多多商城     
1.简述薄层色谱法常见问题及相应解决方案
  所谓薄层色谱法,是指通过利用各成分对同一吸附剂的吸附能力不同,在流动相流过固定相的过程中,连续发生吸附、解吸、再吸附、再解吸,实现各成分相互分离的吸附薄层色谱法分离法。以下根据网上资料,对薄层色谱的一些问题进行简述:
 
  1.如何选择薄层色谱的展开剂:薄层色谱在流动相的选择具有较大的灵活性,而流动相的选择目的是使绝大部分样品能达到较好的分离,与此对应的是流动相要有适当的强度和组成。流动相强度越大,溶质比移值越大,但很可能降低分离能力;另外单一溶剂很难分离较复杂的混合物,根据相似相溶原理,要使用多元溶剂体系。一般展开剂体系选择如下:根据分离样品性质、薄层色谱板性质选择一个二元溶剂体系,通过调节溶剂比例以寻求适合比移值。
 
  2.薄层色谱的通用显色方法:理想的显色希望灵敏度高、斑点颜色稳定、斑点与背景间的对比度好、斑点的大小及颜色的深度与物质的量成正比。在样品组成未知的情况下,通用显色方法显得成尤为重要。一般显色方法有方便并且不破坏样品的紫外照射法,还有通用性强的点蒸汽法,还有制造荧光背景,使原来紫外下无荧光物质被鉴别的荧光试剂法,以及对绝大多数有机物有效但却会存在破坏性的硫酸溶液。
 
  3.怎么提高薄层色谱的点样效率:因为点样是造成薄层色谱定量误差的主要来源。由于定量毛细管更适合较小体积的点样;微量注射器更适合较大体积的点样。这主要是因为微量注射器受小气泡、溶液回爬现象的影响较大。为避免不同定量毛细管间的点样误差,一般建议一块薄层板上用同定量毛细管。但应注意更换样品时,应将毛细管用超声波或不同极性溶剂清洗干净。
 
  由于资料有限,因而上述对薄层色谱使用过程中的一些问题概述并不全面,欢迎补充。

2.薄层色谱法在中药复方制剂中的应用

薄层色谱法在中药复方制剂中的应用

  薄层色谱法又简写为TLC,常用于中药成方制剂中有效成分的定性鉴别。由于该方法鉴别专属性强,使用设备简单,易于操作,故应用广泛,在目前的药品质量标准定性鉴别中(如中国药典和国家食品药品监督管理局标准),已大大地超过了显微鉴别、理化鉴别和光谱鉴别。

  下面对薄层色谱法在中药复方制剂中的应用做一些分析:

  一、医院制剂由于其自身的特殊性,如只能在本院销售,生产和检验设备简陋,生产量小,剂型和品种相对较多,生产中常以水煎煮为主。故在选择处方中的薄层定性药材时,应以选择水溶性成分为先。如芍药苷、栀子苷、黄芪甲苷、龙胆苦苷、人参皂苷等苷类或绿原酸、阿魏酸等易溶于水的有机酸类成分。

  二、仔细分析处方。选择方中薄层定性的药材,应先选取以粉碎入药的药材。因为这部分药材中的有效成分一般没被破坏,特别是一些含有挥发性成分的药材,如薄荷、香附、荆芥等,在薄层层析中以药材作为对照品,很容易鉴别出来。

  三、对处方中含有多糖类或淀粉质较多的药材,如麦冬、北沙参、党参等,可采取先酸解后用有机溶剂提取的方法。经这样处理后,薄层层析斑点一般都比较清晰,药检所复核时往往容易通过。

  四、在使用展开剂时,在同等条件下,应选择无毒或毒性较小的有机溶剂。如选用环己烷而不选用正己烷,选用甲苯而不选用苯。以减少有机溶剂毒性对人体的侵害。

  五、对样品的取样量不宜太大。如果取样量太大,点样时往往因样品的浓度太高而造成点样困难,展开时斑点又不易分离而使薄层图谱不清晰。

  六、对中药复方制剂的液体剂型,提取分离方法应溶剂法,用适宜的有机溶剂提取。如是提取水溶性成分,应考虑对样品进行脱脂处理。对酒剂、酊剂或搽剂中含有的样品,应先在水浴上蒸去后再作下一步的处理。如液体剂型不宜用有机溶剂提取,也可采用先将药液置水浴上蒸干(或加入适量硅藻土分散),再用有机溶剂提取的方法。

  七、对中药复方制剂的固体剂型,提取分离方法可选用超声提取法、回流提取法或溶剂提取法(应先将样品加定量水溶解)等。超声提取方法简单,所需时间短,目前使用较多,应,但在使用过程中应注意一个问题,如提取时使用的有机溶剂是,超声处理时间应控制在10~20min以内,超声时容器不能密闭太紧,以免瓶塞冲出或全部挥发,特别是在气温较高的夏天,尤其要注意。

  八、对中药复方制剂的外用剂型,如软膏剂、黑膏药、贴膏一类,在样品处理时,应首先考虑去掉赋形剂后再对样品进行处理。如用凡士林制成的软膏,可用有机溶剂除去凡士林。

  九、样品经薄层展开后,观察层析情况,笔者认为应多选择在日光下观察为主。原因为大多数医院制剂室未建立暗室,在紫外光灯下拍照有困难。

  十、对样品中某些成分的提取分离,可先采取相类似的方法,然后再选用不同的定容溶液和展开剂,即可达到目的。如同时提取某些皂苷类、苷类、有机酸类等。

  十一、在中药复方制剂中,往往药味较多,化学成分较为复杂,给单一成分的分离造成一定困难。为了达到分离的目的,在具体操作中,可以考虑使用高速离心,柱层析、氧化镁净化、水或氨试液洗涤等多种操作方法。但在使用这些方法时,必须注意不能把应提取的有效成分弃掉了。

  十二、在用碘蒸气或氨蒸气对薄层板显时,所加的量不宜过多,使用的容器必须密闭,操作人不得离开,必须等到薄层斑点显度适宜时,才可取出。

薄层色谱
薄层色谱 薄层色谱法在中药复方制剂中的应用_薄层色谱
3.复方桔梗止咳片的薄层色谱鉴别

摘要:采用薄屠色谱法对复方桔梗止咳片中的桔梗、远志及甘草等进行了定性鉴别。该法可用

于对产品质量的控制。
关键词:复方桔梗止咳片;TLC;鉴别
复方桔梗止咳片是由桔梗、远志(蜜炙)、款冬花(蜜炙)和甘草等四味中药组成,具有镇咳、祛痰之功效,用于治疗伤风咳嗽、咽喉肿痛、急慢性气管炎等。现行质量标准中只有性状一项。为了控制产品质量.本文对桔梗、远志及甘草进行了薄层色谱鉴别研究。
1 仪器与试药
YH140电热恒温干燥箱(广州东方红医疗器械厂);硅胶G(青岛海洋化工厂);桔梗、远志、甘草对照药材、甘草次酸对照品(中国药品生物制品检定所);复方桔梗止咳片(我所抽验样品);阴性样品(按处方工艺制得缺味样品);所用化学试剂均为分析纯。
2 实验方法与结果
2.1 桔梗与甘草的鉴别
2.1.1 样品溶液的制备 取本品10粒.去糖衣.研碎,取细粉1.5g,加盐酸1ml与氯仿20m1.加热回流1h.放冷,分取氯仿层,滤过.蒸干.残渣加乙醇lml溶解,即得。
2.1.2 对照药材溶液的制备 分别取桔梗、甘草对照药材各0.1g,按样品溶液制备方法制成对照药材溶液。
2.1.3 甘草次酸对照品溶液的制备 取甘草次酸对照品加乙醇制成2mg/ml的溶液。
2.1.4 阴性对照溶液的制备 分别取桔梗、甘草外的处方其它药材,按处方工艺分别制备成缺桔梗、缺甘草的阴性样品,再按样品溶液制备方法制成阴性对照溶液:
2.1.5 薄层色谱鉴别结果吸取上述溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(30~60℃) 醋酸乙酯-冰醋酸(25:7:0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以8%香草醛乙醇溶液与硫酸溶液(7~10)的混合液(0.5:5),在105℃ 加热至斑点显色清晰。样品溶液色谱中,在与对照药材溶液、对照品溶液相应的位置上显相同颜色的斑点,阴性对照溶液则无。
2 2 远志的鉴别
2 2.1 样品溶液的制备取本品10片,去糖衣,研碎,取细粉1.5g,加乙醇20ml,加热回流20min,滤过,滤液浓缩至约10ml,放冷,加入3倍量的乙醚,放置使沉淀完全,倾去上清液,加10%盐酸溶液10ml,加热回流30min,放冷,滤过,沉淀物用甲醇5ml溶解,即得。
2.2.2 对照药材溶液的制备 取远志对照药材0.5g,按样品溶液制备方法制成对照药材溶液。
2.2.3 阴性对照溶液的制备 取远志外的处方其它药材,按处方工艺制备成阴性样品,再按样品溶液制备方法制成缺远志的阴性对照溶液。
2.2.4 薄层色谱鉴别结果吸取上述溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿-丙酮-正己烷-醋酸(8:4:0.2:0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%香草醛硫酸溶液,在105℃加热至斑点显色清晰。样品溶液色谱中,在与对照药材溶液相应的位置上显相同的紫色斑点,阴性对照溶液则无。
3 讨论
为了加强薄层鉴别的专属性,曾考虑采用药材及其化学成分单体,但目前尚未找到桔梗、远志药材成分的单体,所以以药材作对照。本文建立的色谱条件,可在同一薄层板上鉴别桔梗和甘草,结果令人满意。
参考文献
1卫生部部颁标准中药成方制剂(第四册) l991:121
2卫生部部颁标准中药成方制剂(第十四册).1997:140~141

 


4.简述薄层色谱工作原理

  【仪器网 使用手册】所谓薄层色谱法,是指通过利用各成分对同一吸附剂的吸附能力不同,在流动相流过固定相的过程中,连续发生吸附、解吸、再吸附、再解吸,实现各成分相互分离的吸附薄层色谱法分离法。
 
  薄层色谱法根据固定相的支持体,分为薄层吸附色谱法(吸附剂)、薄层分配色谱法(纤维素)、薄层离子交换色谱法(离子交换剂)、薄层凝胶色谱法(分子笕凝胶)等。 在一般的实验中,大多使用以吸附剂为固定相的薄层吸附色谱法。 吸附是表面的重要性质。 两个相都能形成表面,吸附是其中一个相的物质或溶解在其中的溶质在该表面密集的现象。 在固体与气体之间、固体与液体之间、吸附液体与气体之间的表面有可能发生吸附现象。
 
  因为各物质性质不同,因此物质分子停留在固体表面是因为固体表面的物质和固体内分子受到的吸引力不同。 在固体内部,分子间相互作用的力是对称的,其力场相互抵消。 固体表面的分子受到的力是不对称的,内侧面是固体内分子的力大,表面层受到的力小,所以气体和溶质分子在运动中碰到固体表面时受到这样的影响而被吸引并停留。 吸附过程是可逆的,被吸附物可以在一定条件下解吸。 在单位时间内被吸附剂的表面积吸附的分子和在同一单位时间内离开该表面的分子之间可取得动态平衡,被称为吸附平衡。 吸附色谱过程是指不断产生平衡和不平衡、吸附和解吸的动态平衡的过程。
 
  由于资料有限,因而上述对薄层色谱概述并不全面,欢迎补充。



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