薄层色谱法又简写为TLC,常用于中药成方制剂中有效成分的定性鉴别。由于该方法鉴别专属性强,使用设备简单,易于操作,故应用广泛,在目前的药品质量标准定性鉴别中(如中国药典和国家食品药品监督管理局标准),已大大地超过了显微鉴别、理化鉴别和光谱鉴别。
下面对薄层色谱法在中药复方制剂中的应用做一些分析:
一、医院制剂由于其自身的特殊性,如只能在本院销售,生产和检验设备简陋,生产量小,剂型和品种相对较多,生产中常以水煎煮为主。故在选择处方中的薄层定性药材时,应以选择水溶性成分为先。如芍药苷、栀子苷、黄芪甲苷、龙胆苦苷、人参皂苷等苷类或绿原酸、阿魏酸等易溶于水的有机酸类成分。
二、仔细分析处方。选择方中薄层定性的药材,应先选取以粉碎入药的药材。因为这部分药材中的有效成分一般没被破坏,特别是一些含有挥发性成分的药材,如薄荷、香附、荆芥等,在薄层层析中以药材作为对照品,很容易鉴别出来。
三、对处方中含有多糖类或淀粉质较多的药材,如麦冬、北沙参、党参等,可采取先酸解后用有机溶剂提取的方法。经这样处理后,薄层层析斑点一般都比较清晰,药检所复核时往往容易通过。
四、在使用展开剂时,在同等条件下,应选择无毒或毒性较小的有机溶剂。如选用环己烷而不选用正己烷,选用甲苯而不选用苯。以减少有机溶剂毒性对人体的侵害。
五、对样品的取样量不宜太大。如果取样量太大,点样时往往因样品的浓度太高而造成点样困难,展开时斑点又不易分离而使薄层图谱不清晰。
六、对中药复方制剂的液体剂型,提取分离方法应溶剂法,用适宜的有机溶剂提取。如是提取水溶性成分,应考虑对样品进行脱脂处理。对酒剂、酊剂或搽剂中含有的样品,应先在水浴上蒸去后再作下一步的处理。如液体剂型不宜用有机溶剂提取,也可采用先将药液置水浴上蒸干(或加入适量硅藻土分散),再用有机溶剂提取的方法。
七、对中药复方制剂的固体剂型,提取分离方法可选用超声提取法、回流提取法或溶剂提取法(应先将样品加定量水溶解)等。超声提取方法简单,所需时间短,目前使用较多,应,但在使用过程中应注意一个问题,如提取时使用的有机溶剂是,超声处理时间应控制在10~20min以内,超声时容器不能密闭太紧,以免瓶塞冲出或全部挥发,特别是在气温较高的夏天,尤其要注意。
八、对中药复方制剂的外用剂型,如软膏剂、黑膏药、贴膏一类,在样品处理时,应首先考虑去掉赋形剂后再对样品进行处理。如用凡士林制成的软膏,可用有机溶剂除去凡士林。
九、样品经薄层展开后,观察层析情况,笔者认为应多选择在日光下观察为主。原因为大多数医院制剂室未建立暗室,在紫外光灯下拍照有困难。
十、对样品中某些成分的提取分离,可先采取相类似的方法,然后再选用不同的定容溶液和展开剂,即可达到目的。如同时提取某些皂苷类、苷类、有机酸类等。
十一、在中药复方制剂中,往往药味较多,化学成分较为复杂,给单一成分的分离造成一定困难。为了达到分离的目的,在具体操作中,可以考虑使用高速离心,柱层析、氧化镁净化、水或氨试液洗涤等多种操作方法。但在使用这些方法时,必须注意不能把应提取的有效成分弃掉了。
十二、在用碘蒸气或氨蒸气对薄层板显时,所加的量不宜过多,使用的容器必须密闭,操作人不得离开,必须等到薄层斑点显度适宜时,才可取出。
摘要:采用薄屠色谱法对复方桔梗止咳片中的桔梗、远志及甘草等进行了定性鉴别。该法可用
于对产品质量的控制。
关键词:复方桔梗止咳片;TLC;鉴别
复方桔梗止咳片是由桔梗、远志(蜜炙)、款冬花(蜜炙)和甘草等四味中药组成,具有镇咳、祛痰之功效,用于治疗伤风咳嗽、咽喉肿痛、急慢性气管炎等。现行质量标准中只有性状一项。为了控制产品质量.本文对桔梗、远志及甘草进行了薄层色谱鉴别研究。
1 仪器与试药
YH140电热恒温干燥箱(广州东方红医疗器械厂);硅胶G(青岛海洋化工厂);桔梗、远志、甘草对照药材、甘草次酸对照品(中国药品生物制品检定所);复方桔梗止咳片(我所抽验样品);阴性样品(按处方工艺制得缺味样品);所用化学试剂均为分析纯。
2 实验方法与结果
2.1 桔梗与甘草的鉴别
2.1.1 样品溶液的制备 取本品10粒.去糖衣.研碎,取细粉1.5g,加盐酸1ml与氯仿20m1.加热回流1h.放冷,分取氯仿层,滤过.蒸干.残渣加乙醇lml溶解,即得。
2.1.2 对照药材溶液的制备 分别取桔梗、甘草对照药材各0.1g,按样品溶液制备方法制成对照药材溶液。
2.1.3 甘草次酸对照品溶液的制备 取甘草次酸对照品加乙醇制成2mg/ml的溶液。
2.1.4 阴性对照溶液的制备 分别取桔梗、甘草外的处方其它药材,按处方工艺分别制备成缺桔梗、缺甘草的阴性样品,再按样品溶液制备方法制成阴性对照溶液:
2.1.5 薄层色谱鉴别结果吸取上述溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(30~60℃) 醋酸乙酯-冰醋酸(25:7:0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以8%香草醛乙醇溶液与硫酸溶液(7~10)的混合液(0.5:5),在105℃ 加热至斑点显色清晰。样品溶液色谱中,在与对照药材溶液、对照品溶液相应的位置上显相同颜色的斑点,阴性对照溶液则无。
2 2 远志的鉴别
2 2.1 样品溶液的制备取本品10片,去糖衣,研碎,取细粉1.5g,加乙醇20ml,加热回流20min,滤过,滤液浓缩至约10ml,放冷,加入3倍量的乙醚,放置使沉淀完全,倾去上清液,加10%盐酸溶液10ml,加热回流30min,放冷,滤过,沉淀物用甲醇5ml溶解,即得。
2.2.2 对照药材溶液的制备 取远志对照药材0.5g,按样品溶液制备方法制成对照药材溶液。
2.2.3 阴性对照溶液的制备 取远志外的处方其它药材,按处方工艺制备成阴性样品,再按样品溶液制备方法制成缺远志的阴性对照溶液。
2.2.4 薄层色谱鉴别结果吸取上述溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿-丙酮-正己烷-醋酸(8:4:0.2:0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%香草醛硫酸溶液,在105℃加热至斑点显色清晰。样品溶液色谱中,在与对照药材溶液相应的位置上显相同的紫色斑点,阴性对照溶液则无。
3 讨论
为了加强薄层鉴别的专属性,曾考虑采用药材及其化学成分单体,但目前尚未找到桔梗、远志药材成分的单体,所以以药材作对照。本文建立的色谱条件,可在同一薄层板上鉴别桔梗和甘草,结果令人满意。
参考文献
1卫生部部颁标准中药成方制剂(第四册) l991:121
2卫生部部颁标准中药成方制剂(第十四册).1997:140~141
4.简述薄层色谱工作原理
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