烟草中的水溶性糖,特别是还原糖是影响烟草吸味的重要化学成分之一,目前烟草中的还原糖和总糖的测定方法主要有氧化还原滴定法,分光光度法,连续流动分析和高效液相色谱法等。液相色谱法是较为可靠的方法,但其样品前处理比较麻烦,且流动相和提取溶剂的不一致会导致示差折光检测器有很大的溶剂峰而干扰分析。我们首次用WatersSugar-Pak1钙型阳离子交换柱分离测定了烟草样品中的4种糖,并建立了用水超声浸取,固相萃取预分离的样品前处理
方法,获得了满意结果。
主要仪器和试剂　高效液相色谱仪
色谱条件　色谱柱
流动相为: 0.05 g/L EDTA
样品处理　

准确称取烟草样品约0.500 g,用50 mL水在40~50℃下超声萃取40 min,过滤,弃去最初的约10mL滤液,收集后面的滤液。取5 mL滤液通过预活化好的Sep-PakC18固相萃取小柱,弃去最初的2 mL,收集后面的3mL用4.5μm滤膜过滤,取20μL进样分析。
结果
实验条件选择　实验选用示差折光检测器检测。钙型阳离子交换柱为分离糖和多羟基化合物专用柱,该柱用0.05g/LEDTA钙钠水溶液作流动相,柱温要求控制在80~90℃之间,实验选用85℃。
样品前处理　由于4种糖都易溶于水,所以实验选用水超声浸取的方法,室温下糖溶出慢,升高温度可加速糖的溶出,但温度过高（超过60℃）会加快多糖,蔗糖和麦芽糖水解;故实验选择浸取温度40~50℃,在该温度下超声浸取30min以上可使糖完全溶出,实验选用超声浸取40min。糖提取液可以当天测定,如放置过夜会导致葡萄糖测定结果稍有偏高。

烟草样品提取液中除了糖外,还含有少量其它杂质成分,会污染色谱柱而降低柱效,所以在进样之前要预分离这些成分。我们采用Sep-PakC18固相萃取小柱预固相萃取和用Sep-Pak Alumin Cartridges保护柱在线分离可有效地除去杂
质成分。

用钙型阳离子交换柱高效液相色谱法测定烟草样品中的糖,并用水超声浸取提取样品中的糖,方法简便快速,结果可靠,样品可实现批量处理,可满足大量样品分析的要求,提高了工作效率。方法用于几种烟样分析,各糖回收率在96%~104%之间,相对标准偏差在0.98%~1.36%之间。结果令人满意。

    操作步骤：

    1、打开电脑

    2、打开主机、预热

    3、进入仪器工作站，联机并设定仪器使用方法及仪器参数

    4、启动泵的动力系统预处理(排气等)

    5、检查是否漏夜、柱压是否正常

    6、设置仪器方法，包括仪器的使用条件等

    7、激活操作方法，等待仪器平衡、基线平直

    8、仪器出现“Ready”后可进行样品分析

    9、操作测试结束后，清理所有实验材料，做好清洁卫生

    10、记录仪器使用日志，并与管理员办理交接手续

    使用注意事项:

    1、高效液相色谱的流动相应采用色谱纯溶剂，以满足仪器要求、避免损坏色谱柱;

    2、严禁使用有污染的水等冲洗色谱柱，避免将互不相溶的溶剂一同进入泵内;

    3、流动相需经过滤、除气后方可使用;

    4、待分析的样品必须彻底溶解澄清、过滤，以避免堵塞、损坏色谱柱;

    5、分析完成后，须注意及时清洗色谱柱和检测器的比色池。