实验室离心机分离方法不一,适用场合也不尽相同。目前主流的离心分离方法主要是差速离心法和区带离心法,其实在实验室离心技术制备超离心法一文中有提及两种离心方法,今天笔者对这两种方法的原理及应用介绍进行补充和完善。
1. 差速离心法:许多具有生物活性的生物大分子和亚细胞器是不稳定的,需要低温高速离心,常用的是差速离心法。通过离心后倒出上清液和沉淀分开,把分离出来的上清液再增大转速离心,分离出第二部分沉淀,这样不断增大转速,逐级分离出所需要的物质。利用这种方法可以有效地分离大小上差别较大的颗粒,但不能分离大小相似的颗粒,而且所分离出来的组分往往是不均一的,杂有其他种类的颗粒。
2.区带离心法:其中又可以分为两种:速率区带离心和等密度速率区带离心。
1) 速率区带离心法:这是将小量悬液放在一平缓的密度梯度液上,用此梯度液来稳定颗粒的沉降。由于离心,颗粒离开起始区带而移动,移动的速度是由颗粒的大小、形状和它们所受实验室离心机的离心力来决定的。离心一段时间历,各种颖粒将按照它们的相对速度移动而各个分开,成为一系列区带。用这种方法我们可以将沉降速度差为20%或者更大的颗粒。
2)等密度区带离心法:这是将要分离的颗粒悬液放至密度梯度液上,或者实际上将颗粒溶于制作梯度的溶液中。通过离心,颗粒或者上浮或者下沉,达到与它们自己密度相同的液体处在这里它们没有重量,不管离心多长时间,它们再也不移动了。这些颗粒可成为一系列区带,每种颗粒在它自己的密度区。所以,这是一种利用颗粒浮密度的大小分离颗粒大小的方法。使用的介质通常是氯化铯(Cscl)和硫酸铯(Cs2SO4)。前者适合于DNA分离,后者适合于RNA分离。这种方法与速率区带离心法相比,它有一个主要的缺点是在离心期间,颗粒不可避免地暴露在高浓度的梯度溶液中,会引起颗粒的部分损伤,并可能出现相当于损伤颗粒的一些额外的区带。
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很多购买实验室离心机的客户第一次使用后都会反映一个问题那就是噪音过大的问题,关于这个问题大部分不是实验室离心机质量的问题造成的,具体有哪些原因造成实验室离心机噪音过大呢?下面我们一起来分一下实验室离心机使用中噪音过大的原因和实验室离心机使用中噪音过大的解决办法;
1)转子没有安装好,一般小的机器都是厂家在出厂前安装和调试好的没有问题才发货的,但是在运输过程中有可能造成转子的活动和轻度的移位,有可能造成使用过程中噪音过大,解决办法是重新安装转子或者电话联系厂家指导安装;
2)转子里的试管等没有配平,特别是水平专子,一定要配平使用,不然也没有可能造成不平的噪音过大;
3)位置没有摆放好,有的离心机放置的桌子或者固定的位置高低不平,可能不是很明显,但是稍微有点的话在高速转动下都会出现声音增大的现象,所以可以的放置离心机的桌面上在放离心机之前底下放置一层厚厚的垫子这样会减少很多的不平造成的噪音;
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离心机是利用离心力,分离液体与固体颗粒或液体与液体的混合物中各组分的机械。
离心机主要用于将悬浮液中的固体颗粒与液体分开,或将乳浊液中两种密度不同,又互不相溶的液体分开(例如从牛奶中分离出奶油);
它也可用于排除湿固体中的液体,例如用洗衣机甩干湿衣服;特殊的超速管式分离机还可分离不同密度的气体混合物;
利用不同密度或粒度的固体颗粒在液体中沉降速度不同的特点,有的沉降离心机还可对固体颗粒按密度或粒度进行分级。
由于样品组分的密度和沉降系数不同,离心分离后的样品沉淀物会形成层状结构。只需要通过上清液倾出就可以实现离心过程。
离心设备实验室离心机8000转每分钟。近些年出现的超速离心是超过万转/分钟,它们被广泛应用于生物化学、医学研究(医用离心机)、实验室研究(实验室离心机)、化验室研究(化验室离心机)、血液分离测试(血液离心机),可以从血浆中的分离出红细胞和白细胞。
离心机在高速旋转的过程中,由离心力所导致的运动使悬浮于液体中的固体物质形成沉淀,也就是悬浮体液中质量或体积较大的物体向转头半径最大的方向移动,而质量或体积较小的部分沉积在转头半径较近的地方。
在离心过程中,乳浊液或悬浮液样品被放置在一个厚壁离心管中,而离心管放置在离心机转子上。
其特征在于通过转子带动离心管快速旋转产生的离心力的作用,样品中的密度较高的成分会加速向离心管的底部沉降。
离心管成对放置,且容量不超过一半左右。这可以防止形成不平衡和样品溢出。
上面我们提到了离心力这个概念。离心机就是一个产生离心力的机器,离心力与转子半径、转速及样品质量有关:
即F=Rmω2(F:离心力:R:半径:m:样品质量:to:转速),离心力是衡量离心机重要的参数之一,也是离心机档次的区别标准之一, 离心机在出厂的时候都会给出该离心机的最大离心力。
我们都知道,转子的半径和样品质量在运转的时候是不变的,只有转速可以通过控制发生变化,因此我们往往习惯用转速来描述一个离心机。如:高速离心机,超高速离心机,低速离心机。
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