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高效液相色谱紫外检测器需要信噪比指标液相色谱操作规程

时间：2020-06-20 来源：仪多多仪器网作者：仪多多商城

【导读】紫外检测器是高效液相色谱中常用的检测器，目前市场上生产厂家及型号很多，厂家通常采用检测器的噪音，基线漂移等技术参数作为产品的灵敏度性能评价指标。考虑到样品的紫外吸收响应值主要与样品有关，与仪器的

紫外检测器是高效液相色谱中常用的检测器，目前市场上生产厂家及型号很多，厂家通常采用检测器的噪音，基线漂移等技术参数作为产品的灵敏度性能评价指标。考虑到样品的紫外吸收响应值主要与样品有关，与仪器的关系不大，一般认为这可以基本反映仪器在灵敏度方面的性能。

本文在实验的基础上证明对同一样品各检测器的响应值实际上也存在不同程序的差异，说明仅使用噪音和基线漂移的指标不能准确显示仪器在灵敏度方面的性能差异，因此，提出用信噪比来评价仪器的灵敏度性能。

2 灵敏度评价指标设置的目的和依据
高效液相色谱及其紫外检测器主要用于化学样品的分析测试。其评价指标必然与其用途相关联。一个分析方法对检测器的要求主要在灵敏度、选择性、精确度和准确性方面。在色谱分析中灵敏度是非常重要的指标。对于灵敏度，在分析测试方法研究中主要使用信噪比、最低检测限，或最低定量限来评价。其中信噪比是评价的核心，因为最低检测限和最低定量限通常用信噪比在2~3和10的量来定义。

但目前厂家通常采用检测器的噪音，基线漂移等技术参数作为产品的灵敏度性能评价指标。这实际上是基于样品的紫外吸收响应值主要与样品有关，与仪器关系不大的假设。根据朗伯比尔定律，对于同样长度的检测池，同样浓度的样品溶液应该具有相同的吸光度。这样，对同样浓度的样品溶液，检测器的响应值应该是相同的，所以上述噪音，基线漂移的参数应该可以用来评价检测器的灵敏度性能。

但是，实验中发现，同一样品溶液在不同检测器中响应实际上存在明显差异，表1显示对于同一种样品溶液，不同厂家和型号检测器的响应值可能相差3倍以上。这时，由于色谱分析主要使用相对比较的间接测定方法，其使用实际上并没有受到多少影响。难以简单认定仪器存在问题。但因为信噪比发生了变化，上述噪音、基线漂移的参数就不能用来评价检测器的灵敏度性能了。

此时，直接使用信噪比来评价检测器的灵敏度性能才是可靠和准确的方法。

3 信噪比指标评价方法
评价信噪比需要测定响应值，需要选定样品，推荐萘和L-苯丙氨酸等在254nm附近有吸收的样品，前者常用于色谱柱性能评价;后者无毒，且对仪器可能存在的偏振现象敏感。当然，即使使用不同的评价样品，只要固定浓度和溶剂，也可以用分光光度计来校正和比较。

根据现有信噪比测定方法，在选定特定浓度的样品后，先在选定波长平衡检测器(此时检测器中的溶液为溶解评价样品的溶剂)，待基线稳定后，将配制好的样品溶液直接灌注到仪器的流路并充满其中，注意不要灌入气泡，信号稳定后再用溶剂将样品溶液冲出来。测定基线上下波动的幅度为噪音值(N)，测定基线中值与样品信号中值的差为信号值(S)。则信噪比为两者的比值(SN)。

4 结论
使用信噪比(SN)指标评价检测器，可以更准确全面地评价各种检测器的灵敏度性能。评价时可以参考现有的信噪比测定方法，建议用254nm作为检测波长，选择简单易得的样品，浓度值的选定应使信噪比SN的值在10以内，以方便测量。配制特定浓度的评价溶液后，以灌注法测定此时相对溶剂的响应值S，测定和计算出信噪比SN的值，作为该检测器对特定评价样品溶液的信噪比评价指标的值。

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　　【仪器网维修保养】液相色谱柱是消耗品，随着使用时间的增长与使用次数的增加，色谱柱的效果会下降。此时需要对色谱柱进行清洁与再生，保证检测的效果。同样，色谱柱的保存也会影响使用寿命与使用效果。在使用完成之后须特别注意。

　　色谱柱的再生

　　反相柱

　　1.准备95：5的浓甲醇水溶液、纯甲醇、异丙醇与二氯甲烷作为流动相；

　　2.按顺序冲洗色谱柱，每种流动相流经色谱柱的量应不少于20～30倍色谱柱体积；

　　3.按相反的顺序冲洗。

　　正相柱

　　1.准备正己烷、异丙醇、二氯甲烷与甲醇作为流动相，所有流动相必须严格脱水；

　　2.按顺序冲洗色谱柱，每种流动相流经色谱柱的量应不少于20～30倍色谱柱体积，异丙醇粘度大，冲洗时应注意放慢流速；

　　3.按相反的顺序冲洗。

　　离子交换柱

　　1.阳离子柱的再生可采用稀酸缓冲溶液冲洗；

　　2.阴离子柱的再生可采用稀碱缓冲溶液冲洗。

　　注意：以上的再生方法不是不可变通的，实际操作中，使用者可按照自身情况选择合适的溶剂作流动相溶解色谱柱内的污染物。但无论用什么方法再生，色谱柱都不能恢复原来的效果。

　　色谱柱的保存

　　反相柱：储存于纯甲醇或乙腈中；

　　正相柱：储存于纯正己烷中，注意须严格脱水；

　　离子交换柱：储存于含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞的水中，并用塑料堵头堵上。

　　注意：若色谱柱使用过含盐浓度较高的流动相，则须用超纯水替换原来的流动相再选择合适的溶液储存。

液相色谱仪液相泵如何预防发生故障

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要保持泵的良好操作性能，必须持续保持系统的清洁，确保使用的溶剂和试剂的质量，流动相进入流路前必须进行过滤和脱气。

     预防泵故障需要持久不间断的努力：
     1）使用试剂和HPLC级溶剂，对泵对色谱柱都有好处；
     2）流动相和溶剂在使用前使用材料过滤；
     3）对流动相和溶剂进处理脱气；
     4）每次开始使用时要排气放空，工作结束后从泵及色谱柱中洗去缓冲液或有害物；不让水及腐蚀性溶剂等有害物质滞留泵及色谱柱中；
     5）定期更换在线过滤圈等垫圈；
     6）严格遵从泵操作手册中的建议。

     处于良好操作状态的泵，应该能使色谱图上的基线平稳；保留时间的重复性好。在等度洗脱时压力波动小于2％。梯度洗脱时压力变化应是缓慢和平稳的。

     为了使故障发生后尽快排除，平时应常备密封、单向阀（入口与出口）、泵头装置、各式接头、保险丝等部件，以及更换工具。