色谱柱如果经过老化就可以使柱效及性能都会变得很稳定,只有通过老化才可以把固定相的残存溶剂,低沸点杂质,低分子量固定液等赶走,使记录器基线平直,所以一定要等到老化后在进行使用,置于色谱仪的操作步骤也是非常重要的,以下就是我身为技术员总结出来的操作步骤。
1、打开氮气、氢气、空气发生器的电源开关,输出压力稳定在0.4Mpa左右。
2、打开色谱仪气体净化器的氮气开关,当色谱仪载气B的柱前压上升并稳定大约5分钟后,打开色谱仪的电源开关。
3、设置各工作部温度,柱箱初始温度50℃,)进样器和检测器都是250℃。
4、待检测器温度升到100℃以上后,打开净化器上的氢气、空气开关,色谱仪的氢气稳定在0.1Mpa,空气压力为0.15Mpa左右,观察基线在氢火焰点着后的电压值应高于点火之前。
5、显示屏左下方应有蓝字显示当前的电压值和时间,待基线稳定后进样品并同时点击“启动”按钮或按一下色谱仪旁边的快捷按钮,进行色谱数据分析。分析结束时,点击“停止”按钮,数据即自动保存。
6、首先关闭氢气和空气气源,使氢火焰检测器灭火。
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市场上,国产和进口色谱柱种类繁多,如何挑选一根适合自己实验室分析的色谱柱?
我们在购买毛细色谱柱的时候,需要知道哪些基础的常识呢?
一、固定液使用
固定相: AT SE-30,AT OV-1
组成 100%甲基聚硅氧烷
极性 非极性
应用 碳氢化合物
同类型号 DB(HP) -1、AC1、SPB-1、CPSIL5、DM-1、RT-1
使用温度 50-300
固定相: AT OV-101
组成 100%甲基聚硅氧烷(胶体)
极性 非极性
应用 氨基酸、基油
同类型号 HP-101、AC1 、SP-2100
使用温度 0-350
固定相: AT SE-52AT SE-54
组成 5%苯基甲基聚硅氧烷,1%乙烯基5%苯基甲基聚硅氧烷
极性 非极性
应用 多核芳烃、酚、酯、碳氢化合物、药物、醇
同类型号 DB(HP)-5、AC5、SPB-5、DM-5、CPSiL8、Rtx-5
使用温度 50-350
固定相: AT OV-1701
组成 7%氰丙基7%苯基甲基聚硅氧烷
极性 非极性
应用 药物、醇、酯、硝基化合物
同类型号 DB(HP)-1701、AC10、DB-1701、SPB-1701、RT-1701、CP-Sil 19CB
使用温度 0-280
固定相: AT XE-60
组成 25%氰乙基甲基聚硅氧烷
极性 中极性
应用 酯、硝基化合物
同类型号 DB (HP) -225、AC225
使用温度 0-280
固定相: AT OV-17
组成 50%苯基甲基聚硅氧烷
极性 中极性
应用 药物、农药
同类型号 DB(HP)-17、AC10
使用温度 0-250
固定相: AT FFAP
组成 聚乙二醇-TPA改性
极性 极 性
应用 酸、醇、醛、酯、腈、酮、基油
同类型号 DB (HP) -FFAP、SP-1000、Supecl-NUKOL、AC20
使用温度 50-250
固定相: AT PEG-20M
组成 聚乙二醇-20M
极性 极 性
应用
同类型号 HP- Wax、DB-Wax、AC20
使用温度 50-200
固定相: AT 农残Ⅰ号AT 农残Ⅱ号
组成
极性
应用 六六六、DDT等八种含氯农药拟除虫菊酯类、含磷类农药
同类型号 SPB-608、HP-608
使用温度 25-300
二、毛细管柱内径
0.53mm 具有近似填充柱的负荷量,总柱效则远远超过填充柱。达到同样的分离度时,0.53mm大口径柱的分析时间显著快于填充柱。可方便的采用柱上进样或直接进样技术,适合于分析不太复杂的样品,是填充柱理想的替代柱。
0.32mm 柱效稍低于0.25mm常规柱,负荷量大于常规柱的60%,用特制注射针可做柱上进样。
0.25mm zui常用的内径规格。有较高的柱效,负荷量较低,必须分流进样或无分流进样。用于复杂多组份样品分析。
0.20mm 柱效高,负荷量低,流失较小,适合与质谱等灵敏检测器联用。
三、毛细管柱长度
5-12m 短柱:分离少于10个组份(不包含难分离物质对)的简单样品。
25-30m 中长柱:分离10-50个组份的样品。
50m 长柱:分离大于50个组份或包含有难分离物质对的复杂样品。
四、膜 厚
0. 1-0. 2um 薄液膜
低负荷量,高温下流失较小,适合于高沸点化合物的分析,适于配高灵敏检测器。
0.25-0.33um 标准液厚
一般商品柱的标准液膜。
0.5-5.0um 厚液膜
较高的样品负荷量,在高温下流失较大,适于分析低沸点样品。
色谱柱的安装:
1)将液相色谱装置中的流动相完全置换后再连接色谱柱,并完全排出流路内的空气。
装置内的液体和所使用的流动相不能相溶的情况下,使用双方都能相溶的液体做过渡。比如从水置换到氯仿的情况,就需要使用丙酮做过渡,才能完全置换。
将盐溶液置换成有机溶剂的时候,需要通过纯水、丙酮的顺序来进行置换。相反,从有机溶剂转换成盐溶液的情况下,需要通过丙酮、纯水的顺序置换。
不仅仅是泵,流动相流动的所有流路都必须进行置换。例如,注入样品的情况,软管内的液体也需要置换。另外,如果使用压力计等别的软管的情况,取下来的管子也必须由流动相洗净后才能继续使用。
2)色谱柱保存方法不对或者长期不使用的情况下,色谱柱的出入口可能会有空气残留。这种情况下,必须先把空气完全排出后才连接到装置中。
避免快速加热,加热温度不要超过色谱柱的最高负荷温度。
把柱子入口侧的螺栓打开,然后加温(一般加温到手心感到温暖的程度就足够了),等液体满出来以后接到装置上。然后,打开出口处的螺栓,用泵送液,等确认出口处有液体流出后,连接到装置中。这样操作,就算后面再连接一根色谱柱也能完全除去空气。
3)在泵运作的时候连接色谱柱。确保能让流动相按照色谱柱上箭头的方向流动的状态连接色谱柱。
4)色谱柱加温使用的时候,先用0.2~0.3mL/min的低流量一边送液一边升温。达到所定温度后,再渐渐的增加流量至测定流量。
5)色谱柱需要安定时间。连接到装置中立即进行测试的情况下,第一次很难得到好的分析结果。
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