高效液相色谱仪也叫高压液相色谱、高速液相色谱、高分离度液相色谱等，它是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱。又因分析速度快而称为高速液相色谱。
由于液相色谱分析技术涉及的样品种类繁多、样品组成及其浓度复杂，样品物理形态多变，对液相色谱仪的正常分析测定造成一些干扰因素，如果不注意仪器的维护和保养，会对日常的分析测定带采不便，所以需要对仪器的使用以及维护要做一些了解才能熟练掌握这种分析技术。
高效液相色谱仪的操作过程：
1、翻开HPLC工作站（包含计算机软件和色谱仪），衔接好活动相管道，衔接检测体系。
2、对抽滤后的活动相进行超声脱气10-20分钟。
3、过滤活动相，根据需求挑选不一样的滤膜。
4进入HPLC操控界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。
5、有一段时刻没用，或许换了新的活动相，需求先冲刷泵和进样阀。冲刷泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲刷进样阀，需求在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲刷时速度不要超越10ml/min。
6、调理流量，初度运用新的活动相，能够先试一下压力，流速越大，压力越大，通常不要超越2000。点击injure，选用适宜的流速，点击on，走基线，调查基线的状况。
7、规划走样办法。点击file，选择select?users?and?methods，能够选择现有的各种走样办法。若需树立一个新的办法，点击new?method。选择需求的配件，包含进样阀，泵，检测器等，根据需求而不一样。选完后，点击protocol。一个完整的走样办法需求包含：a、进样前的稳流，通常2-5分钟；b、基线归零；c、进样阀的loading-inject变换；d、走样时刻，随不一样的样品而不一样。
8、进样和进样后操作。选定走样办法，点击start。进样，一切的样品均需过滤。办法走完后，点击postrun，可记载数据和做符号等。悉数样品走完后，再用上面的办法走一段基线，洗掉剩余物。
9、关机时，先关计算机，再关液相色谱仪。
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现代高效液相色谱中，分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择。但是色谱填料的选择范围很宽，要做合适的选择，首先必须对此有一定的认识和了解。
液相色谱填料可以是陶瓷性质的无机物基质，也可以是有机聚合物基质。液相色谱填料中的有机物基质主要是硅胶和氧化铝。无机物基质刚性大，在溶剂中不容易膨胀。
液相色谱填料中有机聚合物基质主要有交联苯乙烯-二乙烯苯、聚甲基丙烯酸酯。有机聚合物基质刚性小、易压缩，溶剂或溶质容易渗入有机基质中，导致填料颗粒膨胀，结果减少传质，最终使柱效降低。
液相色谱填料的粒度选择
液相色谱填料的粒度主要影响填充柱的两个参数，即柱效和背压。粒度越小，填充柱的柱效越高；然而粒度越小，柱压越大，柱压的增加限制了粒度小于3μm的填料应用。在相同选择性条件下，提高柱效可提高分离度，但不是唯一的因素。如果固定相选择是正确，但是分离度不够，那么选用更小粒度的填料是很有用的。3μm填料填充柱的柱效比相同条件下的5μm填料的柱效提高近30%；然而，3μm的色谱柱的背压却是5μm的2倍。与此同时，柱效提高意味着在相同条件下可以选用更短的色谱柱，以缩短分析时间。另外，可以采用低粘度的溶剂做流动相或增加色谱柱的使用温度，比如用乙腈代替甲醇，以降低色谱柱的压力。
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