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液相色谱仪的应用 液相色谱如何操作

时间:2020-06-28    来源:仪多多仪器网    作者:仪多多商城     
【导读】液相色谱仪是指利用混合物在液-固或不互溶的两种液体之间分配比的差异,对混合物进行先分离,而后分析鉴定的仪器。 基本介绍 液相色谱仪根据固定相是液体或是



    液相色谱仪是指利用混合物在液-固或不互溶的两种液体之间分配比的差异,对混合物进行先分离,而后分析鉴定的仪器。

 


    基本介绍


    液相色谱仪根据固定相是液体或是固体,又分为液-液色谱(LLC)及液-固色谱(LSC)。现代液相色谱仪由高压输液泵、进样系统、温度控制系统、色谱柱、检测器、信号记录系统等部分组成。与经典液相柱色谱装置比较,具有高效、快速、灵敏等特点。


    液相色谱仪使用范围


    应用于生物医学、环境化学、石油化工等部门。


    应用范畴


    高效液相色谱法只要求样品能制成溶液,不受样品挥发性的限制,流动相可选择的范围宽,固定相的种类繁多,因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。


    与试样预处理技术相配合,HPLC所达到的高分辨率和高灵敏度,使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能,能够分离复杂相体中的微量成分。随着固定相的发展,有可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分离HPLC成为解决生化分析问题比较为有前途的方法。


    由于HPLC具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用,流出组分易收集等优点,因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。


    高效液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。液相色谱-质谱连用技术受到普遍重视,如分析氨基甲酸酯农药和多核芳烃等;液相色谱-红外光谱连用也发展很快如在环境污染分析测定水中的烃类,海水中的不挥发烃类,使环境污染分析得到新的发展。





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【导读】   高效液相色谱法的应用远远广于气相色谱法。它广泛用于合成化学、石油化学、生命科学、临床化学、药物研究、环境监测、食品检验及法学检验等领域。   一. 在食品分析中的应用   

  高效液相色谱法的应用远远广于气相色谱法。它广泛用于合成化学、石油化学、生命科学、临床化学、药物研究、环境监测、食品检验及法学检验等领域。

  一. 在食品分析中的应用

  1.食品营养成分分析:蛋白质、氨基酸、糖类、色素、维生素、香料、有机酸(邻苯二甲酸、柠檬酸、苹果酸等)、有机胺、矿物质等;

  2.食品添加剂分析:甜味剂、防腐剂、着色剂(合成色素如柠檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、亮蓝等)、抗氧化剂等;

  食品污染物分析:霉菌毒素(黄曲霉毒素、黄杆菌毒素、大肠杆菌毒素等)、微量元素、多环芳烃等。

  二. 在环境分析中的应用

  多环芳烃(特别是稠环芳烃)、农药(如氨基甲酸脂类,反相色谱)残留等。

  三. 在生命科学中的应用

  HPLC技术目前已成为生物化学家和医学家在分子水平上研究生命科学、遗传工程、临床化学、分子生物学等必不可少的工具。其在生化领域的应用主要集中于两个方面:

  1. 低分子量物质,如氨基酸、有机酸、有机胺、类固醇、卟啉、糖类、维生素等的分离和测定。

  2. 高分子量物质,如多肽、核糖核酸、蛋白质和酶(各种胰岛素、激素、细胞色素、干扰素等)的纯化、分离和测定。

  过去对这些生物大分子的分离主要依赖于等速电泳、经典离子交换色谱等技术,但都有一定的局限性,远远不能满足生物化学研究的需要。因为在生化领域中经常要求从复杂的混合物基质,如培养基、发酵液、体液、组织中对感性趣的物质进行有效而又特异的分离,通常要求检测限达ng级或pg级,或pmol,fmol,并要求重复性好、快速、自动检测;制备分离、回收率高且不失活。在这些方面,HPLC具有明显的优势。

  四. 在医学检验中的应用

  体液中代谢物测定;药代动力学研究;临床药物监测:

  1. 合成药物:抗生素、抗忧郁药物(冬眠灵、氯丙咪嗪、安定、利眠宁、****等)、黄胺类药等。

  2. 天然药物生物碱(吲哚碱、颠茄碱、**碱、强心甙)等

  五.在无机分析中的应用

  阳、阴离子的分析等。

  色谱柱是液相色谱中重要的一个组成部分。众所周知,色谱是一种分离、分析手段,分离是其核心,而色谱柱担负的就是其分离作用,可以说,色谱柱就是液相色谱仪的心脏。保护柱则是为了降低分析柱受污染程度,延长分析柱使用寿命的重要组成部分。
 
  如何使用保护柱
 
  1、专柱专用,避免保护柱成为不同项目间的交叉污染源。
 
  2、及时更换保护柱。当峰的理论塔板数下降15%,或是柱压上升15%,或是关键分离度下降15%时,都应该及时更换保护柱。
 
  3、不慎发生强污染时,可以将分析柱卸下,单独冲洗保护柱,可以使污染物更快的从保护柱中流出。但是不可以超声清洗保护柱,以免损伤柱芯。
 
  保护柱使用注意事项:
 
  1、独立式保护柱与分析柱连接时,连接管路尽可能短,且接口切面平滑,尽量减少死体积以降低柱外展宽效应。
 
  2、卡套式保护柱一般未标注液流方向,使用时应自行标注,并按照标注方向来使用,以免正反向使用后,截留的杂质污染分析柱。
 
  3、直接填装的短柱型保护柱,出现柱压升高或峰型变差时,可不接分析柱进行反向清洗,清洗溶剂可参考分析柱清洗溶剂。
 
  4、卡套式保护柱,柱芯替换时,注意柱芯与柱套是否存在方向上的匹配,同时不易旋拧过紧,以防滑丝。
 
  5、保护柱或柱芯一般不建议超声清洗,因可能对填料表面修饰有影响。
 
  6、如同一保护柱配不同的分析柱使用,每次使用前,保护柱需先清洗并用流动相平衡保护柱一段时间后,再接分析柱使用。
 
  使用保护柱的目的在于延长分析柱的使用寿命,但选择合适的保护柱更加重要,选择或使用不当也可能带来截然相反的效果


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