液相色谱仪作为分析实验室高端必备仪器之一，是实验室分析员应用频率较高的仪器，纵然是经常使用的经验丰富的老司机在使用过程里不可避免的还是往往疏忽一些问题，从而导致一些仪器的故障。方便快速的分析过程固然重要，但是为了多种样品而忽略了一些细节步骤，总是会犯些错。在使用液相色谱仪时四大关键因素，对正确使用极为重要，下面给大家说说：
1、液相色谱仪本身：
对于仪器本身一般不会有问题，特别是刚买回来的新仪器。对于仪器本身重要的就是仪器的校验，刚买回来的仪器一般都是由卖家先对仪器做系统的确认工作（包括IQ、PQ、OQ），确认顺利通过后，再请国家或省级仪器检定局的来校验，检定合格后就可以放心使用了，除此之外，一些做得好的公司每半年会对仪器进行一次的内部校验，目的就是为了保证仪器的正常可运行状态。
2、色谱条件：
色谱条件一般包括流动相、色谱柱、检测波长、流速及进样量。
流动相就涉及到配制流动相所用到的水和试剂试液，水一般要求用超纯水或其他水的电阻率不大于18、2兆欧级别，试剂试液要求用色谱级别的，原因为防止水和试剂试液中的杂质对色谱结果的干扰。
色谱柱会因不同的品种而有不同的要求，但每根色谱柱都有它的清洗要求，这个在色谱柱说明书上都可以找到，一定要根据上面的要求进行，否则会造成色谱柱效下降和色谱柱的使用寿命缩短，检测波长也会因品种的不同有不同的要求，这里需要指出的是要注意观察检测器氘灯能量的变化，比如基线波动大，活性成分的响应值突然变小等，都有可能是氘灯的能量不足所引起的，氘灯一般建议使用800小时，但实际上使用时间不止，可根据实际情况更换。
流速也因品种的不同而不同，一般为1、0ml/min，流速是不可随意改动的，特别是作为QC人员，但是作为研发人员，有时为了摸索条件或进行方法耐用性验证，会对流速进行改变以评价方法的适用性。对于进样量因不同的品种也有不同规定，如果使用六通阀自动进样，一般进样精密度都很好，不需强调什么。
3、操作人员：
首先，作为液相色谱仪操作人员，一定要认真学习液相的说明书，掌握液相硬件和软件的操作，掌握日常的维护保养，掌握最基础故障的排除和维修。
一般液相色谱仪的操作规程也是有操作人员起草的，所以只要严格按照操作要求进行操作，一般不会出现问题，当然这里需要特别指出的是对于液相的日常维护保养很重要，比如流动相的过滤、脱气、泵密封垫的清洗、系统管路的清洗、溶剂过滤头的清洗等，倘若不坚持，很容易导致色谱柱堵塞、系统压力过强、色谱峰异常等不必要的故障，浪费时间。
其次，操作人员在配制液相色谱仪分析用待测样品溶液时，由同一个人单独完成，以免不必要的偶然误差从而造成分析的失败或误差。
4、液相安装环境：
液相色谱仪应尽量安装于水平、远离振动、电磁干扰的屋内的台面上，有条件的话尽量将液相数据处理系统分隔开，一个是防止色谱基线噪音偏大，基线不稳等，一个是为减少对人体的危害。
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液相色谱法是一种以液体为流动相的色谱法，液相色谱法是现在应用十分广泛的一种液相色谱法，这种方法是20世纪60年代兴起的，经过不断的完善和发展，现已被应用于各个领域。在医药分析领域，液相检验的应用已经普及，而液相色谱法作为液相检验中的一种重要手段，也得到了大力的推广与应用，目前实验室常用的P230液相色谱仪。
液相色谱法及其系统构造
液相色谱法是以经典液相色谱法为基础，通过引入气相色谱理论而迅速发展起来的。区别于经典液相色谱法柱效低、时间长的特点，液相色谱法采用了高压泵、固定相和高灵敏度检测器等技术，因此其检测有高压、高速、、高灵敏度、检验速度快、分辨率高等特点，更适宜于分离、分析热稳定性差、高沸点、有生理活性及相对分子量比较大的物质。
HPLC系统一般由输液泵、进样器、色谱柱、溶剂贮存器、检测器、检测数据记录器等组成。其中输液泵、色谱柱和检测器关键。制备型HPLC仪有馏分收集装置。新型HPLC仪增加了微机控制，可进行自动化仪器控制和数据处理。
输液泵性能的好坏直接影响分析结果的可靠性，好的输液泵应具备输出压力高，流量稳定、耐腐蚀，密封性能好，液缸容积小等特点；HPLC进样方式可分为：隔膜进样、阀进样、停流进样、自动进样，进样装置需要：密封性能好，重复性好，死体积小，对色谱系统的压力、流量影响小；色谱柱担负分离作用，是色谱系统的心脏，在选择色谱柱时要注意选择柱效高、选择性好，分析速度快的色谱柱；检测器是把洗脱液中组分的量转变为电信号，其要求线性范围宽、灵敏度高、重复性好、噪音低和适用范围广。
液相色谱的原理及分类
液相色谱的原理主要依靠分离机制，其分离方法有多种，相应的分离机制也不同。根据分离机制的不同主要有四种基本类型色谱法：吸附色谱、分配色谱、分子排阻色谱及离子交换色谱法，其他还有胶束色谱法、化学键合色谱法及亲和色谱法等类别。在液相检验中，分离是核心，而色谱是一种分离分析手段。无论是那种分离方法，其分离原理都是一个物理过程，与液相层析的原理相似：将要检测分析的化合物通过进样器放入液相色谱仪，流动相携带着其流过色谱柱，由于不同物质在固定相上的保留时间不同出现的峰高或者峰面积定量以及出峰时间的不同而达到分离，从而或检测药物中不同成分的含量、或分析药效，或测定药物残留物杂质成分的浓度。
药物含量检验中液相色谱的应用
药物含量检验中定量分析的准确与否，关键在于检测器所产生的信号是否与被测样品的量始终呈一定的函数关系。液相色谱仪可使输出信号与样品量好呈线性关系，这样进行定药物含量测定时既准确又方便。
例如，示差检测法就是用液相色谱测定多糖类药物，用电化学检测器检测的阴离子交换柱分离出多糖类药物，这种方法优于传统检验法，可直接对低浓度糖作定量分析，不需衍生和样品处理，在节约时间和资金的同时避免了有毒衍生试剂的使用。在检验中不同类型的糖(如单糖、糖胺聚糖、半乳糖、果糖等)适用于不同的离子交换柱。
药效检验中液相色谱的应用
药物的治疗效果取决于人体对药物的吸收，与药物成分及其代谢物在血液中的浓度有关。随着现代药物的选择性越来越高，所服用的剂量越来越低，这就需要提高药效。现阶段药效临床试验中采用人肝组织，选择液相色谱法检测药性药效，对混合物中微量组分进行结构分析，可搭配固定相和流动相以达到好的分离效果。
例如，用内标法检测血液中药物浓度的总量限度。内标法是液相色谱的一种常用测定方法。首先提取血液，然后根据规定的方法配制不含药物的溶液，注入到液相色谱仪中，记录为色谱图I，然后再配制含有药物的溶液，以相同的条件注样，记录为色谱图II。然后将图I与图II进行比较，则可以通过杂质峰确认杂质峰的面积，从而达到检验的效果。
药物残留中液相色谱的应用
通常药物在使用一段时间后在体内产生残留物会影响认得某些生理功能，也就是人们所说的食药三分毒，如何分析药物残留物成分，减少其引起的不必要危害，液相色谱法起到了重要的作用。质谱仪是完成药物代谢物毒性鉴定的主要工具，是制药工业中毒理学试验的基础。
今后的医药分析检验研究中，可以应用液相色谱法不受试样挥发性限制等优点，结合其它的先进技术，如色谱——光谱联用、柱切换技术、傅立叶变换红外线吸收光谱联用等，不断提高液相色谱在液相检验中的应用。
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