紫外吸收检测器 ultraviolet absorption detector
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反相液相色谱柱具有无与伦比的性能。即使对于非常难分离的碱性化合物,也可获得出色的峰形,从而改善了这些类型的样品的柱效和分离度。
反相液相色谱柱使用中的注意事项
1、新C18柱在使用前,须先用甲醇或乙腈试剂以20倍柱体积低流速冲洗,作用是使固定相能充分润湿、碳链舒展彻底,使反相液相色谱柱的性能达到更好状态。
具体操作是,将配制好65%的乙腈/水冲洗后,把色谱柱进口端连接在色谱仪上,出口端放空(不可连上检测器,以免污染了检测器),以0.1ml/min~0.5ml/min的低流速将色谱柱中的清稀溶液吹干,过20分钟后再接上检测器,以1.0ml/min的流速,继续冲洗2~8小时;
2、液相色谱仪检测分析样品完毕后,须冲洗色谱柱。尤其是流动相中含有酸或盐时,需将色谱柱中的酸或盐冲洗干净,通常建议用10%甲醇水冲洗20倍柱体积;
3、若反相液相色谱柱处于长期闲置状态时,要将色谱柱彻底冲洗,建议冲洗3-4小时以上,保存在纯有机试剂或高比例的有机试剂溶液中;
4、由于C18柱的固定相疏水性较强,在使用过程中尽量不要使用高水相条件,若水相比例过高易引起固定相疏水塌陷,引起柱效迅速下降,甚至造成不可逆的负面影响;由于碳载量高,表现尤为明显,建议使用过程中水相比例不超过90%;
5、压力升高、柱性能下降:通常为色谱柱被污染,对色谱柱进行再生处理可恢复部分柱效;
6、压力骤升:通常由盐析出或筛板堵塞引起,若是盐析出,用10%甲醇水低流速冲洗至压力恢复即可;若判断并非盐析出,以纯甲醇或10%甲醇水为流动相反冲色谱柱(将色谱柱反接,不接检测器),若反冲半小时仍无效果则说明反冲无效,需寻找其他原因。
在硅胶制造和键合技术方面进行了改进,因此能够获得这样优异的性能,并且这些技术完全由控制。
色谱柱是化学实验中常见、常用的化工仪器之一,正确而有效的使用方法,不仅能够延长色谱柱的使用寿命,也能确保试验的准确性。
1、“保护柱”的使用
保护柱是很短的色谱柱,填装和液相色谱柱相同的填料。正确使用”保护柱”,可以起到阻拦一些容易损坏液相色谱柱的物质的作用。从而达到延长柱子寿命的效果。相反,如果使用”保护柱”不当,可能会缩短色谱柱的使用寿命。例如,在保护柱使用过程中,如果污染达到一定程度而没有及时更换,累积的杂物很可能会冲入色谱柱中,反而会造成色谱柱损坏。因此,在使用”保护柱”时,重要的是要知道什幺时候该换保护柱。该换的时候就必须要立即更换。
2、选择高品质的柱子
一般认为同一厂牌、同一型号的柱子之间的品质都相同,对品质管理很严格的厂家而言,这说法是成立的。但如果厂家品质管理不够严格,即使是同一批号的新柱子之间的品质也有差异。所以,选用柱子时必须选择管理严格的高品质柱子,我们知道,任何柱子使用过后都会产生变化。尤其如在强酸或强碱条件下使用,柱子更易产生变化。因此,应尽量选用pH适用范围大的柱子。在开发新分析方法时,许多专家建议不要使用旧柱子。因柱子一经使用。柱性会改变;如此一来,使用旧柱子开发出来的新分析方法,很可能在再使用同厂牌的新柱子分析时。发生无法达到预定效果的情况。总的说。开发新分析方法时要使用品质好的新柱子;并且一支柱子可以使用在一种分析方法上;则柱子寿命可以延长。
3、定期冲洗色谱柱
一般柱子使用一段时间后总会有一些杂质累积在柱内,而且这些杂质不会随着流动相出来,会逐渐影响柱子的品质。这些杂质在后来的分析谱图上出现。从而造成出现怪峰、基线不平等现象。简单的解决方法是用较强的流动相冲洗。而且每次分析某一产品完成后冲洗。如果分析时使用缓冲剂﹐可以用水来取代缓冲剂。先使用有机和水的混合溶液为流动相冲洗缓冲剂。接着再用100%有机溶剂冲洗。如果直接用100%有机溶剂冲洗的话,缓冲剂很可能会沉淀出来,而损坏柱子的品质。使用10-20倍柱体积的量来冲洗基本就足够了。可以将100%有机溶剂冲洗的条件加在分析实验程序完毕后,如此一来每天在开机前都会用100%机溶剂冲洗。一般硅胶柱可以反冲洗处理﹐即是在将冲洗前将柱子倒反接后再冲洗。打算使用反冲洗处理前,可以先参考柱子的保养说明书。所以要真正保护柱子,使柱子的寿命延长,可以是使用”保护柱”和定期冲洗柱子。
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