常规菌检测的目的是一种指示菌,一般以CFU/ML来计量,比如总菌数和大肠菌群,这两个一般是用来评价食品被污染的程度,因为按常理,我们生活当中接触的致病菌还是相对较少的,而且人体本身也具有免疫功能,所以如果这两个指示菌如果不超标的话,我们就有理由相信该食品是相对安全的,注意:不是绝对安全。所以我们就要对微生物进行检测,二恒温培养箱是检测中必不可少的。
传统的检测方法也很简单,一般就是培养富集后计数,其大致流程是这样:
1)取样,一般都是取25g样品加入到225ml的生理盐水中,取样方法会根据样品不同有所不同。比如肉制品,可以用剪刀剪碎。
2)计数,找一个比较容易计数的梯度进行计数,然后根据稀释倍数反推出样品中的微生物,计数说简单点就是数菌落的数量,如果你涂抹够开的话,每个培养前的微生物会长成一个菌落,所以个1个菌落就代表1个使用恒温培养箱培养前的微生物。(说到这,我就想起我以前老是想,一个菌落是由很多个微生物组成的,光数菌落怎么会得出样品中微生物的个数呢?这就是没有考虑培养前与培养后的变化。
3)稀释,一般来说稀释3个梯度,10倍,100倍,1000倍,而且每个稀释梯度要倒两个平板。
4)均质,要保证均质的力度不能太大,如果太大有可能损害样品中的微生物,有些检验人员可能就是用手捏一捏,甩一甩,也有用拍击式均质器的
5)培养,把事先准备好的培养基(培养基的制备,一般要经过配比,高压灭菌等过程,当然也有配制好的商业培养基,进口的有MERCK,国产的也很多,比如陆桥)倒平板,然后划线培养或者涂抹均匀即可,只要保证尽量把含菌的稀释液涂抹开,不要有菌落重叠的现象,然后放入恒温培养箱的进行培养,培养温度与所检测微生物不同而不同,比如大肠菌群是37度,粪大肠菌群要略高一点,具体多少,我也记得不是很清楚了
常规菌大概就是这样啦,目前大多数检验单位都在使用这种传统的培养方法,其优点就是便宜,廉价,但是比较慢,如今市面上有很多总菌数和大肠菌群的快速商业方法,比如3M,他们在纸片上提供现成的培养基,只需把稀释液直接接种到培养基即可,相比较而言,节省了我们制备培养基的时间,不过貌似在培养时间上并没有缩短。还有检测培养基电导率方法来检测的,因为培养前,培养基都是大分子物质,这些物质的电导率相对较低,经过微生物代谢后,被分解为小分子物质,所以电导率急剧增加,通过建一个曲线来反推微生物的个数。
致病菌的检测是不得检出的,所以要比常规菌要复杂,所耗时间更长,有可能还需要用没有选择性的培养基进行前增菌,然后再用选择性培养基在恒温培养箱中进行增菌,如果有可疑菌落再挑取利用生化反应进行鉴定。
比如沙门氏菌,检测流程大致如下:
1)取样,同常规菌
2)均质,同常规菌
3)前增菌,先要用无选择性的培养基进行富集增菌,因为有可能样品中所含的沙门氏菌受伤,或较少,直接用选择性培养基培养的话,沙门氏菌不会生长,从而出现假阴性。
4)增菌,用选择性的培养基进行培养,这样大部分的微生物在选择性的培养基上都不会生长,就如同过滤一样,如果长菌,根据菌落形态学来判断到底是否为可疑菌落,如果没有可疑菌落,可以判定为阴性,如果有,挑取并做生化反应鉴定是否是真的沙门氏菌。
掌握好这些恒温培养箱的使用方式,可以让我们在细菌检测的过程中,更加的准备,迅速。
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培养箱是培养微生物的主要设备,可用于细菌、细胞的培养繁殖。
原理是应用人工的方法在培养箱内造成微生物和细胞、细菌生长繁殖的人工环境,如控制一定的温度、湿度、气体等。
1、用霉菌培养箱底部调节螺钉调节高度,使箱体安置平稳。
2、插上电源插座(电源应有良好接地),按下电源开关,显示屏亮,此时显示屏所显示的是培养箱室内的实际温度和湿度。
3、加湿器的安装:将加湿器的电源插头插在仪器背面的电源插座上,再将仪器的加湿管与加湿器相连,相连处一定要紧密连接。加湿器水箱里加水一定要按说明书上正确操作。
4、温度调节:按下温度设定按钮,数字显示即为设定值,旋转温度调节电位器到所需温度值,松开按钮,数字显示即为培养室内的实际温度。
此时如培养箱内的实际温度比设定温度小,加热指示灯亮,加热器开始加热;
如培养箱内的实际温度比设定温度大,制冷指示灯亮,制冷系统开始制冷;如加热指示灯与制冷指示灯均暗,则培养箱处于恒温状态。
5、湿度调节:按下湿度设定按钮,数字显示即为设定值,旋转湿度调节电位器到所需湿度值,松开按钮,数字显示即为霉菌培养箱内的实际湿度。
当培养室内的实际湿度比设定的湿度小时,此时加湿对培养室内加湿,加湿指示灯亮;当培养室内的实际湿度比设定的湿度值大时,此时加湿器停止工作,加湿指示灯灭。
6、如箱内不需杀菌时,应将面板上的杀菌开关置于“关”的位置。
7、当温度设定好之后,不能随便将控温旋钮来回多次旋转,以免压缩机启动频繁,造成压缩机出现过载现象,影响压缩机的使用寿命。
8、本机背部装有二组保险盒,2A?为制冷加热负载保险丝盒,8A?为控制电源保险丝盒,若机器运转出现故障,例如控温失灵,不加热或不制冷,须切断电源,分别检查保险丝是否完好,再检查相应部位。
9、搬运时必须小心,搬运时与水平面的夹角不得小于45°。
10、当使用温度较低时,应定期倒掉位于箱内底部积水盘内的积水。
11、加湿器若有故障,请按加湿器使用说明书上的保修点,就近修理。
12、当湿度传感器长时间处于高湿状态,会形成结露即湿度显示值会居高不下,若需要准确的湿度显示值,则应关机后,将培养箱箱门打开,让湿度传感器处于室温中,自然干燥后,即可继续使用。
13、为了保持设备的美观,不准用酸或碱及其它腐蚀性物品来擦表面,箱内可以用干布定期擦干。
14、若湿度长期不用时,请将盒内水倒尽。
15、当仪器在停止使用时,应拔掉电源插头。
霉菌培养箱一般应用于医疗卫生、生物制药、农业科研、环境保护等研究应用领域,是水体分析、BOD测定,细菌、菌种、微生物的培养、保存和植物栽培、育种实验生物培养的专用设备。