色谱柱在使用前，可以进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同;另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是较佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。

　　1、样品的前处理：

　　a、可以使用流动相溶解样品。

　　b、使用予处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。使用0.45?m的过滤膜过滤除去微粒杂质。

　　2、流动相的配制：

　　液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：

　　a、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。

　　b、流动相具有一定惰性，与样品不产生化学反应(特殊情况除外)。

　　c、流动相的黏度要尽量小，以便在使用较长的分析柱时能得到好的分离效果;同时降低柱压降，延长液体泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。

　　d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器，可以使用对紫外吸收较低的溶剂配制。

　　e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。

　　f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。

　　3、流动相流速的选择：

　　因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不同的流速可得到不同的柱效。对于一根特定的色谱柱，要追求较佳柱效，可以使用较佳流速。对内径为4.6mm的色谱柱，流速一般选择1ml/min，对于内径为4.0mm柱，流速0.8ml/min为佳。

　　当选用较佳流速时，分析时间可能延长。可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时，可适当增加甲醇或乙腈的含量)。

流动相脱气是液相色谱仪提高检测性能和保护色谱柱的有效措施。

一、液相色谱仪液相色谱仪流动相脱气的目的：

1、使色谱泵输液均匀准确，减小脉动。

2、提高保留时间和色谱峰面积的重现性。

3、防止气泡引起尖峰。

4、使基线稳定，提高信噪比。

5、降低溶剂的紫外吸收本底。

6、减少死体积。

7、防止填料氧化。

二、液相色谱仪流动相常用的脱气方法：

1、吹氦脱气法：

利用液体中氦气的溶解度比空气低的特性，连续吹氦脱气，效果较好，适合所有溶剂。但成本高，使用较少。

2、加热回留法：

脱气效果比较好，但操作复杂。

3、超声波脱气法：

操作简单，但脱气效果不理想。

4、抽真空脱气法：

利用真空泵降压至0.05～0.07MPa，可除去溶剂中的气体。但抽真空会引起混合溶剂组分的变化，从而影响实验的重现性，多用于单一溶剂体系。

5、在线真空脱气法：

利用膜渗透技术，在线真空脱气，智能控制，成本低，脱气效果明显优于以上几种方法，并适用于多元溶剂体系。

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