当液相色谱仪出现故障时我们如何自检 液相色谱如何操作

    液相色谱仪在人们的生活中占有很大一部分，但是由于没有认真的看说明书，导致一些操作上的问题，使液相色谱仪的使用寿命变短，那到底出现故障我们改怎么解决呢，这篇文章就是针对这个问题来进行讨论的。

    1、气泡溢出

    流动相内有气泡，关闭泵，打开泄压阀，打开purg键，清洗脱气，气泡不断从过滤器冒出，进入流动相，无论打开purge键几次，都无法清除不断产生的气泡。原因过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内，过滤器内部由于霉菌的生长繁殖，形成菌团，阻塞了过滤器，缓冲液难以流畅地通过过滤器，空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动相。处理过滤器浸泡于5%硝酸溶液中，超声清洗几分钟即可；亦可将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小时，轻轻震荡几次，再将过滤器用纯水清洗几次，打开泄压阀，打开purge键清洗脱气，如仍有气泡不断从过滤器冒出，继续将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中，如没有气泡不断从过滤器中冒出，说明过滤器内部的霉菌菌团已被硝酸破坏，流动相可以流畅地通过过滤器。打开泄压阀，打开泵，流速调至1.0～3.0ml/min，纯水冲洗过滤器1小时左右。即可将过滤器清洗干净。关闭泄压阀，纯甲醇冲洗半小时即可。

    2、峰面积重复性不佳

    (1)进样阀漏液。

    (2)加样针不到位。

    (3)液量不足。处理对于第一种情况更换进样阀垫圈；对于第二种情况保证加样针插到底，注射样品溶液后须快速、平稳地从LOAD状态转换到INJECT状态，以保证进样量的准确。日常工作中，液相色谱仪的保养非常重要，如要注意不要让空气进入输液系统和高压泵中，储液器内的溶液如长时间未用应清洗储液器并更换溶液，每次用完色谱仪后缓冲液要用纯水冲洗干净，防止无机盐析出或沉积；样品的前处理也很重要，任何样品都要尽可能地去除杂质，完全溶解，尽量减少对色谱柱的污染，以延长色谱柱的使用寿命，同时避免注射过浓的样品溶液，以免残留液在进样阀内析出固体引起堵塞；色谱柱作好标记，用于不同分析目的的色谱柱不要混用等。

    3、柱压高原因

    (1)缓冲液盐分如(乙酸铵等)沉积于柱内。

    (2)样品污染沉积。处理对于第一种情况先用40～50℃的纯水，低速正向冲洗柱子，待柱压逐渐下降后，相应提高流速冲洗，柱压大幅度下降后，用常温纯水冲洗，之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟；对于第二种情况，由样品的沉积引起污染的C18柱，和纯水反向冲洗柱子，然后换成甲醇冲洗，接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定)，再用换成甲醇冲洗，然后用纯水冲洗，最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。

    4、既无压力指示，又无液体流过

    (1)泵密封垫圈磨损。

    (2)大量气泡进入泵体。处理对于第一种情况，更换密封垫圈；对于第二种情况，在泵作用的同时，用一个50ml的玻璃针筒在泵的出口处帮助抽出空气。

    5、压力波动大，流量不稳定

    原因系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物，使得两者不能密封。处理工作中注意观察流动相的量，保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底，避免吸入空气，流动相要充分脱气。如为单向阀和阀座之间夹有异物，拆下单向阀，放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗。

    6、出峰不佳，峰分叉

    (1)色谱柱被污染。

    (2)柱头填料塌陷。处理对于第一种情况，先用纯水反向冲洗柱子，然后换成甲醇冲洗，接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定)，再换成甲醇冲洗，然后用纯水冲洗，最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。如冲洗后依然出峰不佳，则考虑第二种情况。对于第二种情况，拧开柱头，检查柱填料是否硬结或塌陷。去除硬结部分(污染的填料)，装入新填料，滴一滴甲醇，填料下陷，再填，用与柱内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧，再填平，滴甲醇，再压紧反复几次，直至装满填平。柱头用甲醇冲洗干净，擦净柱外壁的填料，拧紧柱头，用纯甲醇冲洗30分钟以上。

    高效液相色谱仪分析中，选择流动相时应考虑流动相与填料的作用、纯度、与检测器的匹配、粘度、对样品的溶解度和样品回收等方面。

    1、流动相与填料的作用：

    流动相应不改变填料的任何性质。

    低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。

    碱性流动相不能用于硅胶柱系统。

    酸性流动相不能用于氧化铝和氧化镁等吸附剂的柱系统。

    2、纯度：

    色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。

    3、与检测器的匹配：

    当使用UVD时，所用流动相在检测波长下应没有吸收或吸收很小。

    当使用RID时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。

    4、粘度：

    高粘度溶剂会影响溶质的扩散和传质，使柱效降低，还会使柱压增加，分离时间延长。尽量选择沸点在100℃以下的流动相。

    5、对样品的溶解度：如果溶解度欠佳，样品会在色谱柱内沉淀，不但影响纯化分离，而且会使色谱柱恶化。

    6、样品回收：应选用挥发性溶剂。

    高效液相色谱仪分析选择流动相时应注意的问题：

    1.尽量使用高纯度溶剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。不纯的溶剂会引起基线不稳，产生伪峰。

    2.避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降和损坏色谱柱，如使固定液溶解流失和酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。

    3.样品在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。

    4.流动相粘度低（粘度适中）。若使用高粘度溶剂，会增高压力，不利于分离。常用低粘度溶剂有丙酮、甲醇和乙腈等。但粘度过低的溶剂也不宜采用，如戊烷等，它们容易在色谱柱和检测器内形成气泡，影响分离。

    5.化学稳定性好。

    6.流动相应满足检测器的要求。

    对于紫外吸收检测器，应注意选用检测器波长比溶剂的紫外截止波长长。所谓溶剂的紫外截止波长是指当小于截止波长的辐射通过溶剂时，溶剂对此辐射产生强烈吸收，此时溶剂被看作是光学不透明的，会严重干扰组分的吸收测量。

    对于示差折光检测器，要求选择与组分折光率有较大差别的溶剂作流动相，以达到zui高灵敏度。

    液相色谱仪，看你分离的样品的种类，看流动相是否和样品互溶，分离程度，一般加水多少，甲醇，乙腈很多种，看样品的沸点，溶解性。