实验室离心机分离方法不一,适用场合也不尽相同。目前主流的离心分离方法主要是差速离心法和区带离心法,其实在实验室离心技术制备超离心法一文中有提及两种离心方法,今天笔者对这两种方法的原理及应用介绍进行补充和完善。
1. 差速离心法:许多具有生物活性的生物大分子和亚细胞器是不稳定的,需要低温高速离心,常用的是差速离心法。通过离心后倒出上清液和沉淀分开,把分离出来的上清液再增大转速离心,分离出第二部分沉淀,这样不断增大转速,逐级分离出所需要的物质。利用这种方法可以有效地分离大小上差别较大的颗粒,但不能分离大小相似的颗粒,而且所分离出来的组分往往是不均一的,杂有其他种类的颗粒。
2.区带离心法:其中又可以分为两种:速率区带离心和等密度速率区带离心。
1) 速率区带离心法:这是将小量悬液放在一平缓的密度梯度液上,用此梯度液来稳定颗粒的沉降。由于离心,颗粒离开起始区带而移动,移动的速度是由颗粒的大小、形状和它们所受实验室离心机的离心力来决定的。离心一段时间历,各种颖粒将按照它们的相对速度移动而各个分开,成为一系列区带。用这种方法我们可以将沉降速度差为20%或者更大的颗粒。
2)等密度区带离心法:这是将要分离的颗粒悬液放至密度梯度液上,或者实际上将颗粒溶于制作梯度的溶液中。通过离心,颗粒或者上浮或者下沉,达到与它们自己密度相同的液体处在这里它们没有重量,不管离心多长时间,它们再也不移动了。这些颗粒可成为一系列区带,每种颗粒在它自己的密度区。所以,这是一种利用颗粒浮密度的大小分离颗粒大小的方法。使用的介质通常是氯化铯(Cscl)和硫酸铯(Cs2SO4)。前者适合于DNA分离,后者适合于RNA分离。这种方法与速率区带离心法相比,它有一个主要的缺点是在离心期间,颗粒不可避免地暴露在高浓度的梯度溶液中,会引起颗粒的部分损伤,并可能出现相当于损伤颗粒的一些额外的区带。
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实验室用离心机涉及范围特别的广,血液的分离、病毒的研究、DNA的研究、药品的提纯,对溶液中密度不同的粒子进行分离。是放射免疫、生物化学、环境保护等生产和科研单位必备实验仪器。
实验室离心机使用时注意事项:
1、放置离心管的时候一定要对称的放置!!这样才能转起来,保证不偏,比如有四个放置离心管的位置,一定要放入两个离心管而且是隔一个放一个
2、在开启离心机的时候一定要将离心机的盖子盖上
3、开启和关闭离心机的时候一定是速度慢慢增加或者减小的,不能一下子使速度改变很快
4、还有一点,就是在保证离心管对称外,还要保持重量相当。
5、液体可以也不要是沸点太低的,要注意内外气压比。
6、如果是有毒试剂还要做好通风处理。
实验室离心机选型主要根据样品成分、转速要求、容量要求和温控要求等进行选择。
一、样品成分:
不同成分的样品所用的实验室离心机类型有一定规律可循。
二、转速要求:
实验室离心机的最高转速代表着离心机的分离能力,分主机最高转速和转子最高转速。主机最高转速不一定是每个转子的最高转速。
三、容量要求:
指离心管的容量和一次较多可放离心管的数量。
四、温控要求:
指分离样品时需要不需要冷冻。
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