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紫外可见分光光度计工作参数条件的选择 光度计如何操作

时间:2020-07-02    来源:仪多多仪器网    作者:仪多多商城     
【导读】1、测量波长在定量分析中,为了提高测定的灵敏度,入射光的波长应选择被测物的最大吸收波长λmax,如果λmax有干扰,可选择另一条灵敏度稍低、但能避免干扰



    1、测量波长
    在定量分析中,为了提高测定的灵敏度,入射光的波长应选择被测物的最大吸收波长λmax,如果λmax有干扰,可选择另一条灵敏度稍低、但能避免干扰的谱线,所以,适当选择入射光的波长,不仅能提高测定的灵敏度,还能提高测定的准确度。
    2、狭缝宽度
    狭缝宽度过大,入射光的单色性差;狭缝宽度太小,入射光的强减弱。狭缝宽度过大或过小均会造成灵敏度降低,较佳选择是产生最小误差情下的最大狭缝。一般选用仪器的狭缝宽琶度应小于待测样品吸收带的半宽度,否则测得的吸光度值会偏低,狭缝宽度的选择应以减少狭缝宽度时供试品的吸光度不再;加为准,对于大部分被测品种,可以使用2nm缝宽。
    3、控制适当的吸光度范围
    可通过控制被测物浓度或改变吸收池厚度来实现吸光度合理的范围,以尽量减小测量误差。一般吸光度尽量控制在0.1-0.8范围。
    4、空白溶液的选择
    空白溶液是用来调节吸光度测量工作零点即A=0,T=100%的溶液,以消除溶液中其它基体组分以及吸收池和溶剂对入射光的反射和吸收所带来的误差。根据情况不同,常用空白溶液有如下几种选择。
    ①溶剂空白当溶液中只有待测组分在测定波长下有吸收,而其它组分无吸收时,可用纯溶剂作空白。
    ②试剂空白如果显色剂或其它试剂有吸收,而待测试样溶液无吸收,则用不加待测组分的其它试剂作空白。
    ③试样空白如果试样基体有吸收,而显色剂或其它试剂无吸收,则用不加显色剂的试样溶液作空白。





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【导读】分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源,通过系列分光装置,从而产生特定波长的光源,光源透过测试的样品后,部分光源被吸收,计算样品的吸光值,从而转化成样



    分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源,通过系列分光装置,从而产生特定波长的光源,光源透过测试的样品后,部分光源被吸收,计算样品的吸光值,从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。常用于核酸,蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。

    操作方法:

    接通电源,打开仪器开关,掀开样品室暗箱盖,预热 10 分钟。

    将灵敏度开关调至“1”档(若零点调节器调不到“0”时,需选用较高档。

    根据所需波长转动波长选择钮。

    将空白液及测定液分别倒入比色杯 3/4 处,用擦镜纸擦清外壁,放入样品室内,使空白管对准光路。

    在暗箱盖开启状态下调节零点调节器,使读数盘指针指向 t=0 处。

    盖上暗箱盖,调节“100”调节器,使空白管的 t=100,指针稳定后逐步拉出样品滑竿,分别读出测定管的光密度值,并记录。

    比色完毕,关上电源,取出比色皿洗净,样品室用软布或软纸擦净。

    三大注意事项:

    分光光度计应放在干燥的房间内,使用时放置在坚固平稳的工作台上,室内照明不宜太强。热天时不能用电扇直接向仪器吹风,防止灯泡灯丝发亮不稳定。

    分光光度计使用前,使用者应该首先了解本仪器的结构和工作原理,以及各个操纵旋钮之功能。在未按通电源之前,应该对仪器的安全性能进行检查,电源接线应牢固,通电也要良好,各个调节旋钮的起始位置应该正确,然后再按通电源开关。

    分光光度计在仪器尚未接通电源时,电表指针必须于“0”刻线上,若不是这种情况,则可以用电表上的校正螺丝进行调节。





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    原子吸收分光光度计将在上述领域的科研、生产工作中起到人们意想不到的巨大作用。但是,要用好原子吸收分光 光度计并不是一件容易的事。


    主要是因为影响原子吸收分光光度计分析误差的因素太多。本文将根据笔者的使用实践,并结合有关文献,从zui常用的火焰法和石墨炉法两个方面来讨论影响原子吸收分光光度计分析误差的主要因素和如何用好原子吸收分光光度计等问题。

 


    火焰法


    影响火焰法原子吸收分光光度计分析误差的主要因素,归纳起来大约有36个以上:


    1、火焰高度;2、吸收线(灵敏线和次灵敏线);3、火焰温度;4、火焰稳定性;5、燃气和助燃气的质量;6、助燃比;7、雾化率;8、气体流量大小;9、气体流量稳定性;10、试样的吸喷量;11、原子化效率;12、扣背景方式;13、扣背景水平;14、光源强度;15、光源的热稳定性;16、光源的电源稳定性;17、灯电流大小;


    18、边缘能量;19、波长范围;20、波长准确度;21、波长重复性;22、杂散光;23、透镜的色差;24、透镜的透过率;25、光栅的闪耀波长;26、光栅的反射率;27、单色器中反射镜的反射率;28、光谱带宽(sbw);29、光电倍增管(pmt);30、pmt高压;31、放大器的噪声;32、放大器的漂移;33、数据处理方法(计算方法);34、环境(电、磁场)干扰;35、环境温度;36、整机供电电源等。


    石墨炉法


    影响石墨炉法原子吸收分光光度计分析误差的主要因素,归纳起来大约有49个以上:


    1、光源强度;2、吸收线(灵敏线和次灵敏线);3、光源灯泡稳定性(热稳定性);4、光源电流稳定性(纹波、漂移等);5、石墨管结构(平台、普通);6、石墨管加热方式(纵向、横向);7、石墨管温度稳定性;8、原子化效率;9、扣背景方式(氘灯、自吸、塞曼);10、扣背景能力;11、升温速度;12、加温方式;13、干燥温度;14、干燥时间;15、灰化温度;16、灰化时间;17、原子化温度;18、原子化温度保持时间;


    19、清洗温度;20、清洗时间;21、边缘能量;22、波长范围;23、波长准确度;24、波长重复性;25、杂散光大小;26、透镜的色差;27、透镜的透过率;28、光栅的闪耀波长;29、光栅的反射率;30、单色器中反射镜的反射率;31、sbw;32、pmt(id;gan);33、pmt高压(i0;sd;sr);34、放大器增益;35、放大器漂移;36、电子学系统的噪声;


    37、数据处理(计算方法);38、进样技术(手动);39、环境中电、磁场干扰;40、环境温度;41、环境中振动源干扰;42、供电电源(电流;电压);43、保护气种类;44、保护气质量;45、保护气流速;46、内气和外气比例的选择;47、计算公式(非线性拟合方程);48、标准溶液是否标准(制备方法、浓度大小);49、空白溶液的选择(火焰时,空白溶液不能为0,否则不稳;测量rsd时,一般空白溶液为0.5%的硝酸)等。


    以上49个因素中,只要有一个不好,就不可能得到好的分析结果,就将严重影响分析测试结果的可靠性。这些因素都是研制者(或生产者)如何保证石墨炉原子吸收分光光度计质量、使用者如何选择和用好石墨炉原子吸收分光光度计时应高度重视的问题。







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