一、液相色谱理论发展简况
色谱法的分离原理是：
溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从定相中流出。又称为色层法、层析法。
色谱法比较早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。
液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC)。又因分析速度快而称为高速液相色谱法(High Speed Liquid Chromatography，HSLP)。也称现代液相色谱。
二、HPLC的特点和优点
HPLC有以下特点：
高压——压力可达150~300 Kg/cm2。色谱柱每米降压为75 Kg/cm2以上。
高速——流速为0.1~10.0 ml/min。
高效——可达5000塔板每米。在一根柱中同时分离成份可达100种。
高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。
HPLC与经典液相色谱相比有以下优点：
速度快——通常分析一个样品在15~30 min，有些样品甚至在5 min内即可完成。
分辨率高——可选择固定相和流动相以达到较佳分离效果。
灵敏度高——紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg。
柱子可反复使用——用一根色谱柱可分离不同的化合物。
样品量少，容易回收——样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。
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流动相脱气是液相色谱仪提高检测性能和保护色谱柱的有效措施。
一、液相色谱仪液相色谱仪流动相脱气的目的：
1、使色谱泵输液均匀准确，减小脉动。
2、提高保留时间和色谱峰面积的重现性。
3、防止气泡引起尖峰。
4、使基线稳定，提高信噪比。
5、降低溶剂的紫外吸收本底。
6、减少死体积。
7、防止填料氧化。
二、液相色谱仪流动相常用的脱气方法：
1、吹氦脱气法：
利用液体中氦气的溶解度比空气低的特性，连续吹氦脱气，效果较好，适合所有溶剂。但成本高，使用较少。
2、加热回留法：
脱气效果比较好，但操作复杂。
3、超声波脱气法：
操作简单，但脱气效果不理想。
4、抽真空脱气法：
利用真空泵降压至0.05～0.07MPa，可除去溶剂中的气体。但抽真空会引起混合溶剂组分的变化，从而影响实验的重现性，多用于单一溶剂体系。
5、在线真空脱气法：
利用膜渗透技术，在线真空脱气，智能控制，成本低，脱气效果明显优于以上几种方法，并适用于多元溶剂体系。
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高效液相色谱仪光电二极管阵列检测器（DAD）是20世纪80年代出现的一种光学多通道检测器，是紫外检测器的重要进展，又称快速扫描紫外检测器，在高效液相色谱中得到大量使用，是高效液相色谱比较为有发展和可以的检测器。
一、可以同时得到多个波长的色谱图，计算不同波长处的相对吸收比。
二、可以在色谱分离同时，对色谱峰的指定位置实时记录吸收光谱图，并得到最大吸收波长。
三、在色谱运行期间，可以逐点进行光谱扫描，得到时间、波长和光强度的三维谱图。
四、选择性好。可以选择宽波带进行检测，能一次把所有组分检测出来。
五、光学通量低（带宽通量较窄）。
六、与普通UVD相比更复杂，容易漂移。
七、灯输出能量随时间降低。
八、DAD的一些特殊功能：
1、色谱峰的准确定性。
2、色谱峰的纯度检验。
3、.选择较佳波长。
4、建立光谱库，检索被测样品的光谱。
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