今天讲下二氧化碳培养箱的使用方法,主要是针对刚刚应用二氧化碳培养箱的新手,需要注意的事项。
首先、 做好使用前的准备工作
二氧化碳培养箱应由专人负责使用,操作盘上的任何开关和调节旋扭一旦固定后,不要随意扭动,以免影响箱内温度,二氧化碳浓度,湿度的波动,同时降低机器的灵敏度。箱子的放置要水平,避免阳光直射和灰尘等,要保证仪器周围的气流循环,后部及侧面应留出5 cm的空隙。加装稳压电源保证电源电压波动不超过220 V±10%。所加入的水必须是蒸馏水或无离子水,防止矿物质储积在水箱内产生腐蚀作用,经常检查箱内水是否足够,水位应加至“水位指示灯”灭灯时为止。使用前箱内应用消毒酒精或碘溶液彻底擦洗,防止其他微生物污染,导致实验失败。在房间安装空调,使环境温度保持在25~C左右。所使用的二氧化碳必须是纯净的,否则降低二氧化碳传感器的灵敏度和污染二氧化碳过滤装置。
其次、正确充气延长二氧化碳传感器使用寿命
二氧化碳培养箱箱内气压由二氧化碳气体传感器控制。二氧化碳传感器正常反馈要求进气压为Medical Equipment Vo1.22,No.4 0.06 MPa。当箱内气压降低时,二氧化碳传感器在低压刺激下有节奏地开闭,向箱内慢慢充气,当进气压达0.1 MPa时,自动停止调节。如充气方法不当,使进气压力增大,当超过0.1 MPa甚至0.2 MPa压力,会损伤二氧化碳传感器。开始这种损伤效应不明显,不易察觉,反复错误操作,二氧化碳传感器损伤累积最终致命损坏,使气压调节失灵。因此,二氧 化碳传感器寿命与二氧化碳进气压大小有关,只要做好进气压调节,就能保护二氧化碳传感器性能。二氧化碳传感器价格昂贵,更换不易,所以一定要做好进气压调节,延长二氧化碳传感器使用寿命。
第三、做培养时注意培养箱湿度
箱内湿度对于培养工作来说是一项非常重要然而又经常被忽略的因素。因为饱和湿度环境可以避免培养液中二氧化碳逃逸,培养液中pH值稳定,有利于细胞生长, 足够的湿度水平并且要有足够快的湿度恢复速度(如在开关门后)才能保证不会由于过度干燥而导致培养失败。所以二氧化碳培养箱使用过程中,在箱内托盘中放一 定量的灭菌水(3/2至全盘),使箱内成为饱和湿度环境。如使用者忘记补加水,使培养细胞处于低湿度甚至干热环境中,培养液二氧化碳气体易挥发,液体pH 值升高,影响细胞生长,在工作中要力求避免此问题发生。样本多时,箱内分区存放,培养物用筐或瓷盘存放,这样存取快速,缩短开门时间,减少箱内气体和湿度 变化,节省气体,稳定了细胞生长环境。
通过以上3点注意事项,相信新手对二氧化碳培养箱的使用细节有了进一步了解,更好的延长二氧化碳传感器使用寿命。
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二氧化碳培养箱广泛应用于医学、免疫学、遗传学、微生物、农业科学、药物学的研究和生产,主要用于为细胞、组织的体外培养提供稳定的培养环境。因此选择二氧化碳培养箱就要注重以下几个指标:
一、温度控制
温度加热方式一般分水套式和气套式。水套式适合实验环境不太稳定(如有用电限制或经常停电)的用户选用,气套式特别有利于短期培养以及需要箱门频繁开关取放样的培养。此外,对于使用者来说气套式设计比水套式更简单化(水套式需要对水箱进行加水、清空和清洗,并要经常监控水箱运作的情况,还有潜在的污染隐患)。
精确可靠的温控系统是培养箱不可或缺的重要部分。目前市面上主流的温度传感器有两线制和四线制PT100温度传感器,其中四线制比两线制更为精确。用户应选用高精确度的温度传感器并且具备相互独立多重温度控制功能的二氧化碳培养箱,即箱内温度控制、高/低温报警、多重过温保护等。同时,在选择气套式的培养箱时,培养箱内还应装有风扇以保证箱内空气的循环和流通,保证箱内的温度、CO2浓度、相对湿度的专一性。
二、二氧化碳浓度控制
CO2浓度可以通过红外传感器(IR)或热导传感器(TC)进行监测。热导式技术成熟,易漂移,但是受环境影响比较大,精确性比较差。当需要精确的培养条件和频繁开启培养箱门时,此控制系统就显得不太适用了。红外传感精确,应用在进气口具有HEPA高效空气过滤器的培养箱较合适。
无论哪种CO2测量系统在使用一段时间后都会产生漂移,而产生漂移后直接会导致箱体内二氧化碳浓度不能稳定在预设的设定值,致使培养失败,所以建议在选购培养箱时必须要选择带有CO2测量系统自动校准功能的二氧化碳培养箱。
三、相对湿度控制
箱内湿度对于培养工作来说是一项非常重要然而又经常被忽略的因素。目前大多数的二氧化碳培养箱是通过水盘的蒸发作用产生湿气的,其产生的相对湿度水平可达95%左右,但开门后湿度恢复速度很慢。我们在此建议用户在选购二氧化碳培养箱的时候尽量选择带湿度控制系统的二氧化碳培养箱,能更好的监控和调节相对湿度,保证培养的正常进行。
四、防污染
污染是导致细胞培养失败的另一个主要因素,因而,方便、高效的消毒灭菌技术的是必不可少的。目前常用的灭菌技术有:90度湿热灭菌、、160度干热灭菌、180度干热灭菌、纯铜内胆、紫外灯照射、消毒剂擦拭等。其中,90度湿热灭菌,被证明是有效的灭菌方式,但用时太久,高达25小时;温度高于140度的干热灭菌被证明是有效的灭菌方式,160度干热灭菌,温度居中,既能有效杀灭细菌(包括嗜热菌)又不至于损坏电子器件,是干热灭菌的温度;180度干热灭菌温度太高,对电子器件有一定的损伤,因此会限制灭菌的次数;50%以上的含铜材质具有一定的抑菌和灭菌的效果,但是在湿热的环境中极易生锈;紫外灯照射受照射时间、照射的强度、有无遮挡物等影响,不能保证灭菌效果;消毒剂擦拭只有擦到的部位才能起到灭菌的效果,受表面形状、光洁度等影响。因此我们建议客户选购二氧化碳培养箱时灭菌方式采用160度干热灭菌,并且应该是全箱体灭菌,最大可能降低污染的发生。
五、其它因素
二氧化碳培养箱的容积也是一个不可忽略的因素,买小了不够用,大了又浪费又占地方。二氧化碳培养箱的可选容积非常广,而且每种类型又有不同的容积可选。此时,就需要您在选购前对所需培养箱容积的范围有一个比较准确的了解,并在此基础上多预留一点空间,以保证不时之需。另外一些其他功能也是客户选购时按照自己的需求需要考虑的,比如气瓶自动切换、文件记录功能、氧气浓度控制等。
二氧化碳培养箱操作使用
1.二氧化碳培养箱应有良好的接地装置,以保证安全。
2.使用中应经常监视减压阀输出压力及二个流量计的流量,切不可随意拧动控制箱内的各类阀门。若二氧化碳培养箱内浓度有偏差,应先找出各相关数值不准的原因,才能略为调整。
3.钢瓶压力不足1Mpa时应及时更换,更换钢瓶时,应先将钢瓶开关关闭,拧松减压阀螺轴,再拆下减压阀重新安装在新的钢瓶上。
4.本机应安装在空气干净、无日光直射、无强电磁场及辐射能量,周围温差变化较小的室内。为保证二氧化碳培养箱控温精度,建议在15℃-25℃的环境下使用。
5.开机前应熟读使用说明书,掌握正确的使用方法,特别注意钢瓶开启前,一定要拧松减压阀,防止输气胶管爆破。
6.当环境温度与设定温度差小于(RT、5℃)时,应用空调降低周围环境温度,在培养的全过程中,应保持环境温度没有明显的变化,否则因环境温度的变化,引起二氧化碳培养箱内控温不准。
7.在打开二氧化碳培养箱内门时,应先关闭二氧化碳控制开关,关门后,待CO2浓度显示屏显示“0.0”时,再打开CO2控制开关。
8.在首次使用本机或长期不用后重新使用本机时,均应按使用方法第1条至第3条要求操作,尤其在正式培养时应作污染检查。
9.在打开玻璃门时,应按使用方法3,进行操作,防止箱内温度和CO2浓度恢复时因累计而产生“过冲”现象。