1、氘灯外罩污染:不要用手直接接触氘灯外罩,手上含有的油脂类物质会阻碍氘灯的光源的发射光,导致读数偏低。一旦不小心用手直接接触到了氘灯,在氘灯安装之前可用异丙醇对氘灯做清洁工作。
2、氘灯的开关频率:频繁的开关及过长时间的开灯等都会对灯的寿命产生影响,一般氘灯点亮后须要30分钟左右的稳定时间。特别注意的是在氘灯刚刚关闭时要等其冷却之后才能再次开启。因为氘灯如果在未冷却状态时被打开,很可能造成灯丝整体结构的烧坏。
3、避免剧烈物理震荡:如灯是亮着的话,很可能将灯丝弄坏甚至是弄断。(因为当氘灯点亮时其温度有2700K度,此时灯丝几乎是液态的。)
4、可更换氘灯的信号:
a、灯的外壳边缘看不见蓝色的光线。(肉眼可见);
b、石英外套变黑。(灯关时进行检查,冷却并更换);
c、之前分析方法中从未出现过的非线形现象(光的吸收率不为线形);
d、在正常设置情况下基线漂移严重;
e、正常进样时不出峰。
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怎样选择色谱柱
现代高效液相色谱中,分离效果好坏的一个重要指标是色谱填的选择。但是色谱填料的选择范围很宽,因此,要做合适的选择,必须对此有一定的认识和了解。
一. 硅胶基质填料
1·正相色谱
正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica)以及其他具有极性官能团胺基团,如(NH2,APS)和氰基团(CN,CPS)的键合相填料。
由于硅胶表面的硅轻基(SiOH)或其他极性基团极性较强,因此,分离的次序是依据样品中各组份的极性大小,即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。
正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低,如:正己烷(Hexane)、氯仿(Choroform)、二氯甲烷 (Methylene Cloride)等。
2,反相色谱
反相色谱用的填料常是以硅胶为基质,表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。
反相色谱所使用的流动相极性较强,通常为水、缓冲掖与甲醇、乙情等的混合物。
样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组份最先被冲洗出,而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。
常用的反相填料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H,(Phenyl)等。
二·聚合物填料
聚合物填料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸醋等,其主要优点是在pH值为1一14均可使用。
相对于硅胶基质的C18填料,这类填料具有更强的疏水性;大孔的聚合物填料对蛋白质等样品的分离非常有效。
现有的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料,色谱柱柱效较低。
在使用高效液相的过程中,管路的堵塞是常发生的故障之一。下文为您介绍液相色谱管路堵塞的原因与解决方法。 液相色谱管路阻塞的原因: 1、没有很好过滤流动相; 2、样品中有微粒; 3、泵或进样器垫圈产生碎片; 4、预柱、护柱和分析柱中漏出填料; 5,毛刺和锉屑进入; 6、流动相中的结晶盐; 7、微生物 8、系统中进入了其它颗粒性物质。 液相色谱管路阻塞解决方法: 系统中管路阻塞的现象很少见,常见的是烧结过滤片(玻璃砂芯)阻塞。用烧结过滤器或过滤片(孔径2-10um)能去掉阻塞管路的微粒(如0、25mm管径)。用系统分段法检查阻塞的管路,从后向前分别松开接头检查,找到阻塞管路后,应立即拆下来疏导或换新。 如果是非刚性物质阻塞,如生物样品中的生化物质(蛋白质)、微生物等,可用极细的金属丝导通,也可以在火头上烧一烧,使有机物炭化,而后再导通。 如果是刚性物质阻塞,要导通则十分困难,采用反冲的办法有时能成功。就是将管子调头用泵冲洗。操作时要注意保护眼睛和裸露的皮肤,因阻塞物会以很高的速度冲出来。无法导通的管路要换上同样规格的管子。如果换上新管后又被阻塞,则应该停机检查上面提到的引起阻塞的几种原因。液相色谱仪管路阻塞的解决办法