在细菌学诊断工作中,常需要从被检材料中分离细菌,并获得纯培养(即单独一种细菌的培养物)。因此,通常要用到离心机对样品进行离心分离,细菌的离心机分离培养技术是细菌学诊断中的一项重要基本操作。
分离细菌的方法很多,常用的有以下几种。
将被检材料接种于适宜培养基,再于固体培养基表面生长的菌落中,选样欲分离菌的单个菌落,移种于另一适宜培养基中培养。因为一个菌落通常由一个细菌生长繁殖所形成,故培养出的细菌是单一的种类,即纯培养。
用特殊的培养环境(如厌氧、二氧化碳环境等)分离细菌。
将被检材料接种子易感动物体内,使病原菌在动物体内繁殖,然后从动物体内取材料利用离心机进行离心分离出需要的成分后培养。利用某些细菌对一些理化因素有特殊抵抗力,用理化方法处理接种材料,杀死其他微生物而保存需要的细菌,再分离培养。
一般情况下,被检材料用前两种方法分离培养即可。如披捡材料污染严重,可先用后两种方法处理,再用前两种方法获得纯培养。
在分离培养操作中,严格遵守无菌操作。所有用具、培养基、试剂都要经过灭菌,而且不能长时间暴露于空气中。禁止用手接触或用口吹已灭菌的器皿内部。
根据被检材料中可能存在的病原苗的特性,选择适当的培养基和培养条件:(温度、气体环境等)。进行未知菌的初次分离,可以多用几种培养基,如肉汤、鲜血琼脂、麦康克琼脂等,每种培养基接种数管,分别放在普通环境和厌氧环境中培养。一般经过24—78小时观察结果,但也有一些病原菌,需要培养校长时间才能生长。
被检材料一般不需要处理,直接按种于培养基上。当怀疑为有芽脑的病原苗时,可将被检材料加生理盐水磨碎,作成1:10乳剂(液体材料不必稀释),置60-80℃水浴中20—30分钟,以杀死无芽胞的杂菌,然后再接种于培养基中。
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离心机是利用离心力,分离液体与固体颗粒或液体与液体的混合物中各组分的机械。离心力的大与小,转动速度、旋转半径岱以及物质的融质量而决定。
离心机广泛运用于化学工程、石油、食品加工、制药、选矿工程、炭、水处理、核能工业和船舶等部门。
离心原理:
当含有细小颗粒的悬浮液静置不动时,由于重力场的作用使得悬浮的颗粒逐渐下沉。粒子越重,下沉越快,反之密度比液体小的粒子就会上浮。微粒在重力场下移动的速度与微粒的大小、形态和密度有关,并且又与重力场的强度及液体的粘度有关。象红血球大小的颗粒,直径为数微米,就可以在通常重力作用下观察到它们的沉降过程。
此外,物质在介质中沉降时还伴随有扩散现象。扩散是无条件的的。扩散与物质的质量成反比,颗粒越小扩散越严重。而沉降是相对的,有条件的,要受到外力才能运动。沉降与物体重量成正比,颗粒越大沉降越快。对小于几微米的微粒如病毒或蛋白质等,它们在溶液中成胶体或半胶体状态,仅仅利用重力是不可能观察到沉降过程的。因为颗粒越小沉降越慢,而扩散现象则越严重。所以需要利用离心机产生强大的离心力,才能迫使这些微粒克服扩散产生沉降运动。
离心就是利用离心机转子高速旋转产生的强大的离心力,加快液体中颗粒的沉降速度,把样品中不同沉降系数和浮力密度的物质分离开。
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