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液相色谱仪注意事项有哪些 液相色谱如何操作

时间:2020-07-10    来源:仪多多仪器网    作者:仪多多商城     

1、泵正常工作时,在流动相和流速不变的前提下柱压应该是稳定的,当然在换流动相时压力变化是正常的,正常情况下如果柱压升高基本上都是由色谱柱使用时间长引起的(只有更换色谱柱),如果正常情况下压力突然降低有可能是(1)接头处有漏液的地方,采取的方法是有滤纸检查,如有漏液的地方用扳手拧紧即可。如果没有漏液则可能是(2)白色的管子里面有气泡从而导致流动相进不到泵里面去,采取的方法是排气泡。排气时:先STOP停泵--打开排气阀--按PURGE(快冲)键--等气泡排完后先STOP停泵--拧紧排气阀,其先后步骤不要搞反了。

2、泵正常工作时zui高压力不要超过200KG,所以打开泵以后可以将泵的zui大压力调到200KG,这样如果压力超过上限则会自动报警停机,流速不用超过1ML/MIN,如果使用时压力超过200KG,建议将流速调低点以降低压力(在色谱柱正常的情况下),如果是因为色谱柱长时间使用造成压力升高则建议更换色谱柱(因为色谱柱属于耗材长时间使用就需要更换,更换的主要依据色谱柱出峰不正常或者柱压力过高)。

3、泵正常工作时平均每15天左右向注油孔加润滑油2-3滴。

4、流动相里面如果有盐或酸类,做完实验后要先用95%二次蒸馏水与5%甲醇洗色谱柱40分钟左右,然后用纯甲醇洗30分钟左右才可以关机。第二天如果继续做实验流动相里面仍旧有盐或酸类,先用95%二次蒸馏水与5%甲醇过渡20分钟,再用流动相。如果流动相里面只有甲醇,水,乙腈,做完实验后就不用95%二次蒸馏水5%甲醇冲洗,可直接用纯甲醇洗30分钟即可关机。

5、C18色谱柱的耐酸PH值范围3-8使用时不要超出。

6、仪器长期不用时一定要将滤头泡在甲醇里半月开机一次,如果开机时泵抽不上液可以打开排气阀按PURGE快冲。

7、调反压器时要注意等液体流出来以后才能调,一般调8--10KG,比如现在泵显示屏显示柱压50KG那再增加10KG显示屏上显示柱压60KG然后拧紧锁紧螺母。

8、关机顺序:清洗液路时可以把检测器直接关机,清洗结束后先按STOP让泵停止后再关电源,不允许直接关机

流动相脱气是液相色谱仪提高检测性能和保护色谱柱的有效措施。

一、液相色谱仪液相色谱仪流动相脱气的目的:

1、使色谱泵输液均匀准确,减小脉动。

2、提高保留时间和色谱峰面积的重现性。

3、防止气泡引起尖峰。

4、使基线稳定,提高信噪比。

5、降低溶剂的紫外吸收本底。

6、减少死体积。

7、防止填料氧化。

二、液相色谱仪流动相常用的脱气方法:

1、吹氦脱气法:

利用液体中氦气的溶解度比空气低的特性,连续吹氦脱气,效果较好,适合所有溶剂。但成本高,使用较少。

2、加热回留法:

脱气效果比较好,但操作复杂。

3、超声波脱气法:

操作简单,但脱气效果不理想。

4、抽真空脱气法:

利用真空泵降压至0.05~0.07MPa,可除去溶剂中的气体。但抽真空会引起混合溶剂组分的变化,从而影响实验的重现性,多用于单一溶剂体系。

5、在线真空脱气法:

利用膜渗透技术,在线真空脱气,智能控制,成本低,脱气效果明显优于以上几种方法,并适用于多元溶剂体系。

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------责任编辑:瑞利祥--分析仪器采购顾问

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  【中国仪器网 使用手册】色谱柱可分为填充柱和开管柱两大类。多为金属或玻璃制作。有直管形、盘管形、U形管等形状。液相色谱通常均采用填充柱。而对于液相色谱而言,色谱填料的选择有时候恰恰决定了样品分析效果的好快。今天小编就围绕常见的色谱填料种类,讲解一下,应该如何针对仪器使用环境对色谱填料进行合适的选择。
 
  硅胶填料
 
  硅胶填料主要应用正相色谱及反相色谱柱中,正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica),以及其他具有极性官能团,如胺基团(NH2,APS)和氰基团(CN,CPS)的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他团的极性较强,因此,分离的次序是依据样品中的各组份的极性大小,即极性强弱的组份先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低,如:正乙烷(Hexane),氯仿(Chloroform),二氯甲烷(Methylene Chloride)等。反相色谱填料常是以硅胶为基础,表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。反相色谱所使用的流动相极性较强,通常为水,缓冲液与甲醇,已腈等混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强组合先被冲出,而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。常用的反相填料有C18(ODS)、C8(MOS)、C4(B)、C6H5(Phenyl)等。
 
  聚合物填料
 
  聚合物调料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等,其主要优点是在PH值为1~14均可使用。相对与硅胶基质的C18填料,这类填料具有更强的疏水性;大孔的聚合物填料对蛋白质等样品的分离非常有效。现在的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料,色谱柱柱效较低。
 
  其他无机填料
 
  其它HPLC的无机填料色谱柱也已经商品化。由于其特殊的性质,一般于特殊的用途。如石墨化碳也用于正逐渐成为反相色谱填料。这种填料的分离不同与硅胶基质烷基键合相,石墨化碳的表面即是保留的基础,不再需其它的表面改性,该柱填料一般比烷基键合硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强,石墨化碳可用于分离某些几何导构体,又由于HPLC流动相中不会被溶解,这类柱可在任何PH与温度下使用。氧化铝也可用于HPLC,氧化铝微粒刚性强,可制成稳定的色谱柱柱床,其优点是可在PH高达12的流动相中使用。但由于氧化铝与碱性化合物作用也很强,应用范围受到一定的限制,所以未能广泛应用,新型氧化锆填料也可用于HPLC,商品化的仅有聚合物涂层的多孔氧化锆微球色谱柱,应用PH范围1~14,温度可达100℃。由于氧化锆填料几年才开始研究,加之面临的实验难度,其重要用途与优势尚在进行中。


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